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伪狂犬病核酸疫苗及其佐剂的研究

张术  
【摘要】:伪狂犬病是一种由伪狂犬病毒引起的急性传染病,可引发妊母猪流产、死胎以及呼吸道症状。该病在猪群中具传播快、死亡率高、流行范围广、传播途径多、病原体顽固等特点,每年给养猪业造成了巨大损失。因疫苗免疫是预防该病的主要策略,故许多研究在发展和改进现有常规疫苗的同时,纷纷探索利用生物技术研制和开发安全有效的新型基因工程疫苗及其配套的血清学鉴别诊断方法来控制PR。 迄今为止,在猪伪狂犬病毒中已经发现了11种糖蛋白,各种糖蛋白在构成PRV毒力中的作用是不一样的,其中gB、gC、gD是最主要的结构蛋白,在诱导免疫应答方面起着重要作用。本研究构建了以pVAX-1为骨架的真核表达载体,gB、gC、gD基因的重组质粒(pVgB、pVgC、pVgD)以及gB基因N端的三个表位区串联序列的重组质粒(pBEP)。互相串联的表位之间的接头序列的选择对表位的递呈能够产生影响。七种候选DNA疫苗构建好后,经酶切鉴定、DNA测序分析证明无误,进行质粒大量抽提、纯化制备,与pVAX阴性对照组及PBS空白组一起免疫Balb/c正常小鼠(共11组,每组6只),检测免疫指标(间接ELISA法测免疫后小鼠血清抗体及抗体亚型水平),比较其免疫效果。为了增强疫苗的免疫反应,选择DDA(Dimethyldioctadecylammonium Bromide)和BCG-DNA(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG)作为pVgD的佐剂,免疫小鼠后,对其诱发产生的体液和细胞免疫的相关免疫指标作出进一步评价(淋巴细胞细胞因子的检测及CTL实验)和比较,也对所选用的佐剂作出评价和比较。根据所检测的各项免疫指标得到以下结果:1.各组疫苗均能产生针对PRV的特异性抗体,IgG分型:IgG1和IgG2a的水平均明显升高(p0.05);2.gB、gC、gD三种基因联合免疫比其单独免疫的效果要好(p0.05);3.伪狂犬病gB表位DNA疫苗的免疫效果比全基因疫苗的效果要好(p0.05),能诱导更强的体液免疫;4.应用佐剂后抗体水平和脾细胞分泌的细胞因子比单纯使用DNA疫苗均有提高(p0.05),CTL反应也增强(p0.05),可以用于免疫调节。通过我们的实验及其对免疫机制的探讨,为进一步探索防治猪伪狂犬病打下基础。


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