肾移植早期CD4～+增殖T细胞ATP生物荧光技术的临床研究

【摘要】：器官移植受者在术后需要终生服用免疫抑制剂来避免排斥的发生,但随着移植物存活率改善,受者发生药物中毒、机会性感染和癌症的风险增加。如何了解移植受者术后的免疫状态,合理应用免疫抑制药,在免疫抑制不足和免疫抑制过度之间取得平衡,是移植临床面临的重要课题。同时有必要了解有关受者的基本免疫反应性、外科创伤、麻醉、异体器官免疫原性和免疫抑制药物药代动力学差异等综合因素对整体细胞免疫影响,虽然目前能反映整体或特异细胞免疫状态的方法很多,但缺少一些快速又灵敏的检测方法。Sottong PR等通过与传统淋巴细胞增殖试验(LPA)的比较,提出了一种快速又灵敏的免疫细胞功能测定的方法,即在全血中测定增殖CD4~+细胞内ATP的生物荧光技术。本文报告了应用这种技术研究健康人和临床肾移植受者早期细胞免疫状态的结果。 目的 建立增殖CD4~+细胞内ATP生物荧光测定法,评估ATP测定法检测肾移植早期受者的细胞免疫能力的临床价值,探讨其在指导临床上免疫抑制剂调整中的可行性。方法 收集50例健康人、52例肾移植受者手术前后和肺部感染受者的临床资料,对健康人和肾移植受者(术前,术后3d、7d、14d、30d,感染前后)的血液标本进行淋巴细胞亚群的分析与增殖CD4~+细胞的ATP测定;应用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞的亚群,即测定CD4~+细胞和CD8~+细胞的比值和绝对值;ATP测定法包括植物血凝素刺激细胞,单抗包被的免疫磁珠选择CD4~+细胞,和应用生物荧光定量的方法检测代谢性标记物(ATP),定量分析CD4~+淋巴细胞的早期增殖反应。结果 得到标准曲线,在log-log对数水平,当标准品ATP浓度为1-10~4ng/ml时,与荧光发光信号呈良好的直线关系(直线回归方程式Y=0.75X+2.37,相关系数为0.9948,P0.05)。健康人增殖CD4~+细胞的ATP值为516±257ng/ml,而肾移植受者术前ATP值为404±190ng/ml,诱导组为393±203ng/ml,均较健康组低,有显著统计学差异。ATP值在移植术后早期的变化:术后1周左右降至最低,为147±96ng/ml,诱导组尤其明显,为