用噬菌体随机肽库筛选hCD81模拟小肽

【摘要】：丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染引起的一种世界性传染病,目前全球HCV感染者近1亿7千万。HCV急性感染后约40-60%以上患者发展为慢性感染,其中部分病人可发展为肝硬化或肝癌。迄今为止,对HCV慢性感染尚无高效的特异性治疗方法。 HCV属于黄病毒家族,是单股正链RNA病毒,基因组全长约9.5kb,有一个大的开放阅读框,可翻译成一个约3000个氨基酸的多聚蛋白前体,该前体蛋白在宿主信号肽酶和病毒自身蛋白酶的加工下,产生结构蛋白(C,E1,E2,)和非结构蛋白(P7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A,NS5B等)。 HCV的包膜糖蛋白E2分布于病毒颗粒表面,可能与病毒和宿主间免疫应答及介导病毒进人靶细胞等过程密切相关,因此成为预防HCV感染研究中的主要角色。E2蛋白能与肝细胞表面的多种分子结合,其中,人CD81分子(hCD81)已被公认为是HCV的重要受体。虽然CD81介导HCV感染的机制尚不清楚,但是体外试验表明,CD81分子是HCV感染原代肝细胞以及肝源性肿瘤细胞所必需的。因此,靶向人CD81的模拟分子对于HCV感染的治疗有着应用前景,这也是目前HCV治疗药物领域的一个研究热点。在本实验中,我们首先分别在哺乳动物细胞中表达了HCV E2蛋白和在大肠杆菌中表达了人CD81分子大胞外环。再以hCD81单抗为配基,从噬菌体12肽库中筛选hCD81模拟小肽,通过实验证明能竞争抑制HCV E2和hCD81的结合。第一部分 HCV包膜E2蛋白和人CD81分子大胞外环的表达及HCV假病毒的构建用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)分泌表达HCV包膜E2蛋白。首先根据1b基因型HCV包膜E2蛋白编码基因的核苷酸序列设计并合成引物,以聚合酶反应(PCR)扩增HCV包膜E2蛋白外段基因;将neo基因插入真核表达质粒pCI-neo的内含子基因的剪切供体与剪切受体位点之间,而将HCV包膜E2蛋白基因置于Deo基因内含子的3′端,构建了新型的哺乳动物细胞表达质粒载体pCIDA-neo-E2。该质粒载体利用真核启动子高水平调控HCV包膜E2基因的表达,借助于内含子的剪切功能筛选用的标记基因(neo)仅低水平表达。以表达质粒pCIDA-neo-E2

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5	罗海波,郭海萍,刘北一,朱平,富宁;模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究[J];免疫学杂志;2002年04期
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8	韩照中,苏国富,黄翠芬;利用噬菌体展示文库筛选纤维素结合结构基元[J];生物化学与生物物理学报;1998年03期
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16	孟淑芳,李秀华,尹红章,宋爱京,李德富;噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位[J];中华微生物学和免疫学杂志;2003年01期
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1	罗海波;刘北一;刘艳君;朱平;富宁;;以特异性噬菌体克隆为靶筛选TNF-α结合肽的研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
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7	路秀英;杨贵贞;;应用噬菌体展示短肽探索腺病毒表位[A];第七届中国抗炎免疫药理学术会议论文摘要集[C];2000年
8	颜玲娣;宫泽辉;秦伯益;;从噬菌体十二肽库中筛选吗啡的抗原模拟表位[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年
9	向军俭;钟振宇;杨红宇;黄峙;;应用噬菌体展示技术从随机肽库中筛选碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的功能性表位[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
10	郝文波;徐伟文;李明;陈白虹;李中齐;;细胞间黏附因子-1与恶性疟原虫感染红细胞结合位点的鉴定[A];中国原生动物学学会第十一次学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年

中国博士学位论文全文数据库

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2	宗宪磊;KGF和TGF-β1噬菌体模拟肽改善创面愈合质量的实验研究[D];山东大学;2010年
3	徐德斌;脂多糖结合蛋白功能位点分析及其抑制性多肽的筛选[D];第三军医大学;2004年
4	王瀚;人结直肠癌多肽探针的实验研究[D];陕西师范大学;2013年
5	陈益国;金葡菌肽聚糖模拟肽疫苗候选保护性作用的初步研究[D];南方医科大学;2011年
6	纪滨;噬菌体肽库筛选MT1-MMP特异性亲和肽在肿瘤显像中的基础研究[D];吉林大学;2012年
7	郑山根;LPS多表位模拟肽及抗原性的研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
8	徐岩;基于蛋白质结构的多肽与类似物的设计，合成及在生物医学中的应用[D];吉林大学;2013年
9	曾燚华;生殖支原体MgPa模拟表位的筛选与鉴定及其MAP免疫效果的观察[D];南华大学;2012年
10	李雪松;整合素αvβ3特异性结合短肽筛选及功能分析[D];第三军医大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	单雪;人食管癌细胞特异性结合肽的噬菌体肽库筛选及鉴定[D];吉林大学;2012年
2	裴亚峰;赭曲霉毒素A无毒免疫学快速检测方法的研究[D];河南科技大学;2012年
3	孙文霞;结核分枝杆菌抗原模拟肽纳米金生物传感器诊断结核病的研究[D];湖南师范大学;2011年
4	赵红蕾;肝癌细胞特异结合肽的筛选及与抗菌肽融合产物的抑瘤活性[D];吉林大学;2012年
5	唐波;VPAC1特异性结合多肽配体筛选与鉴定的研究[D];第三军医大学;2013年
6	贾彦琼;玉米赤霉烯酮无毒ELISA检测方法的初步建立及脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的筛选[D];暨南大学;2013年
7	黄伦亮;广谱趋化作用抑制剂的体内筛选及其活性鉴定[D];暨南大学;2010年
8	刘淑均;采用噬菌体肽库筛选Rh（D）血型抗原模拟表位及其鉴定[D];安徽医科大学;2013年
9	杨廷亚;应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位及其ELISA抗体检测方法的建立[D];南京农业大学;2011年
10	丁艳;肺结核患者外周γδT细胞Vδ2-CDR3序列特征及其合成多肽结合抗原肽的筛选和鉴定[D];蚌埠医学院;2012年

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