皮肤细胞色素P450酶的表达调控及相关药物代谢研究

【摘要】：皮肤是人体最大的器官,是机体和外界之间的天然屏障,可防止外界有害物质的入侵,也是药物经皮吸收的给药部位。皮肤表达有多种代谢酶,是肝外药物代谢的主要器官之一。细胞色素P450酶系(cytochrome P450,CYP)是一组含亚铁血红素的酶,参与了许多内源性物质如类固醇、脂肪酸、胆酸、维生素D_3、前列腺素、儿茶芬胺和许多进入体内的外源性物质如药物、杀虫剂、毒物、致癌物的代谢。涉及药物代谢的CYP酶系主要有CYP1、CYP2和CYP3三个家族。各类CYP酶在维持皮肤的正常生理功能和保持内环境的稳定方面发挥着重要的作用。研究皮肤中的CYP酶的表达特点有助于明确药物的经皮吸收机理和药物在皮肤的代谢过程,从而对提高药物治疗效果、开发经皮给药新制剂、防止药物和毒性物质对皮肤的侵害等,具有重要意义。 近年来,皮肤CYP酶的研究已成为皮肤药理学的研究热点。一方面皮肤是过敏和炎症的频发部位,发病机制复杂,角质形成细胞和成纤维细胞等参与了皮肤过敏、炎症和免疫反应。探讨病理因素在皮肤CYP酶表达调节中的作用,为探索皮肤疾病的发病机制及临床治疗提供新靶点。另一方面,各种皮肤疾病的治疗离不开药物,而这些治疗药物又是多种CYP酶的底物,探讨皮肤CYP相关的药物代谢,有助于合理选择治疗药物,减少药物不良反应。 本研究首先建立了用于检测皮肤多种CYP酶表达的免疫组化和Realtime PCR方法,考察了角质形成细胞和健康人皮肤组织CYP的表达特点。采用Oligo GEArray毒理与药物耐受基因芯片检测银屑病患者皮损组织和经组胺刺激的HaCaT细胞CYPmRNA的表达改变,Realtime PCR法定量检测CYP酶在HaCaT细胞中的表达调控,考察了细胞因子TNFα,IL-2,IL-6,IFNγ对CYP mRNA表达的影响,研究了地塞米松和苯巴比妥对CYP的诱导作用。选择右美沙芬为CYP2D6的探针药物,采用LC/MS/MS方法检测代谢产物去甲基右美沙芬的转化量,研究其在大鼠皮肤匀浆中的代谢过程,并与肝匀浆代谢比较,来考察大鼠皮肤CYP2D6酶活性和特比萘芬对CYP2D6的抑制作用。