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Ad.FnCBD_(64)转染人内皮祖细胞构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

侯广杰  
【摘要】:目的:通过转基因技术增强人内皮祖细胞(EPCs)的粘附力,并在生物反应器内整体构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)。方法:通过Ficoll密度梯度离心从人骨髓标本中获得骨髓单个核细胞(BMNCs),差异贴壁法从中分离培养内皮祖细胞(EPCs)。采用T-PLS搏动泵作为脉动流场动力源并改进气液交换通路构建新的生物反应器。构建携带FN信号肽序列的重组腺病毒Ad.FnCBD_(64),分别采用Western-blot和ELISA法检测转染细胞后FnCBD_(64)的表达和分泌。检测Ad.FnCBD_(64)转染EPCs后对细胞粘附力影响,并在生物反应器内进行TEHV培养的初步研究。结果:EPCs体外培养增殖快速,可定向分化为内皮细胞;构建的生物反应器可以产生0-6000ml/min的脉动流量,并满足培养TEHV的要求;构建的带有FN信号肽序列的重组腺病毒Ad.FnCBD_(64)转染EPCs后,细胞能高效表达和分泌FnCBD_(64)且细胞粘附速度和粘附数量均显著高于对照组(P0.05)。整体构建的TEHV的实验中,通过生物反应器内7d小流量脉动流场(0-600ml/min)的培养,Ad.FnCBD_(64)转染组的TEHV有较多细胞存留;但在大流量流场(0-4800ml/min)培养中,TEHV的细胞无存留。结论:EPCs是一种较为理想的TEHV种子细胞来源;携带信号肽序列的Ad.FnCBD_(64)转染EPCs可有效提高细胞的粘附力,有助于TEHV的构建,但目前方法构建的TEHV还不能耐受大流量流体的冲刷,未来TEHV的研究还有很多问题需要解决。


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