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聚乳酸—聚乙醇酸支架种植自体细胞构建组织工程食管替换犬颈段食管的实验研究

鲍春荣  
【摘要】:目的:分离、培养、扩增犬自体种子细胞,自体骨髓间充质干细胞诱导分化为上皮样细胞;设计制作人工生物可降解支架;将自体种子细胞种植于支架上构建组织工程食管;以组织工程食管移植替代犬部分颈段食管。方法:体外培养自体食管上皮细胞和肌成纤维细胞,自体骨髓间充质干细胞以表皮生长因子诱导分化,免疫细胞化学等鉴定;聚乳酸—聚乙醇酸(PLGA)材料以粒子浸出法结合模压或注塑成型制作多孔支架,进行组织学、电镜等检测;静态和动态种植细胞于支架上,培养构建组织工程食管,进行组织学、免疫组化、电镜等检测;以组织工程食管置入替换部分犬颈段食管,胃造瘘给予营养,不同时间点处死取材进行检测。结果:成功分离并培养扩增了自体种子细胞,骨髓间充质干细胞可以诱导分化为上皮样细胞,其细胞角蛋白及上皮膜抗原免疫细胞化学染色阳性;PLGA支架有一定力学强度,孔隙率90%左右,孔径180~280μm;种子细胞在PLGA支架上黏附生长良好,体外可成功构建组织工程食管;术后犬长期存活,人工食管早期轻度扩张,后趋于正常,一个月见腺体形成,两个月后见肌层再生。结论:自体种子细胞易于获得并在体外扩增;PLGA多孔支架适合作为组织工程食管支架;自体细胞种植于PLGA支架上培育出的组织工程食管可以替换犬部分颈段食管并取得良好效果。


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