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蛋白质组学技术筛选新生隐球菌侵袭血管内皮细胞相关蛋白质及其表达研究

汪晓军  
【摘要】: [背景]新生隐球菌侵袭人体的途径是以孢子的形式吸入呼吸道,引起局部的感染后通过某种机制进入血循环,播散至全身其他组织,甚至侵袭中枢神经系统,引起巨大危害。在这个过程中,新生隐球菌需要通过肺血和血脑人体两大天然屏障。而血管内皮细胞作为人体天然屏障的重要组成,新生隐球菌对血管内皮细胞的影响无疑在隐球菌病发病的过程中起到了重要的作用,了解这一过程的发生发展对揭示隐球菌病发病机制具有重要意义。[目的]利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋白质谱的变化,筛选差异表达蛋白,并在基因的转录层面进行验证。[方法]利用二维凝胶电泳技术获得新生隐球菌孵育后血管内皮细胞与正常血管内皮细胞的蛋白质谱,以软件分析两者之间的差异表达蛋白质点,并对部分差异蛋白点进行质谱鉴定分析。以实时荧光定量PCR技术分析部分差异表达蛋白的mRNA表达。[结果]新生隐球菌孵育后血管内皮细胞与正常血管内皮细胞的双向蛋白电泳图谱中共找到可信差异表达蛋白点19个。其中有5个蛋白点仅在对照组细胞中表达,3个蛋白点仅在实验组细胞中表达,另有10个蛋白点在实验组细胞中表达降低,1个在实验组细胞中表达升高。经质谱鉴定,共得到PrxⅠ、S100A10等13个差异表达蛋白。通过实时荧光定量PCR检测,证实新生隐球菌孵育4小时后血管内皮细胞的PrxⅠmRNA转录水平明显下降,S100A10的mRNA的转录水平明显升高,其趋势与相应蛋白的表达趋势相一致。[结论]新生隐球菌侵袭血管屏障可能通过以下两个方面的机制:1. PrxⅠ等蛋白的表达下降可能促进了HUVEC的凋亡,减少其增殖和修复,从而破坏血管壁的完整性。2. S100A10等蛋白的表达上升可能增加了血管内皮细胞的细胞骨架活动,加强其细胞迁移、胞吞、胞吐作用,从而使新生隐球菌穿越血管内皮细胞层。


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