收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中国东海海洋微生物环肽类活性物质研究

朱洪平  
【摘要】: 海洋覆盖地球面积70%以上,且生态环境复杂多样。其中蕴育着大量的微生物资源,丰富的生物多样性预示其代谢产物的化学多样性。近期对海洋放线菌的药物筛选揭示,海洋微生物发现新化合物的几率远远高于陆地微生物。因此,海洋微生物以其代谢产物的化学多样性、独特的生理活性和潜在的药物开发前景引起了科学家的广泛关注。 在我国的四大海域中,渤海、黄海和南海的微生物资源的研究较多,而对于东海海域微生物的大规模大面积的资源调查、活性菌种的筛选还未见报道。本课题组在2004年5月,从中国东海离岸35海里的区域采集了7个海水、28个海泥样本,利用稀释涂平板法从中分离得到1043株微生物样本,并利用稻瘟霉模型作为活性初筛模型,得到216株对稻瘟霉具有较强抑制活性的菌株。 本论文选取了其中一株活性较强的F9947菌株作为研究对象,通过16 SrDNA的PCR扩增、测序以及一系列生理生化特性的研究,对该菌株进行了分类;对该菌株的最适发酵条件进行了摸索;对发酵液的抗稻瘟霉活性成分进行了追踪分离并利用现代光谱学方法(IR、NMR、ESI-MS)对化合物的结构进行鉴定;对这些化合物进行了生理活性的研究。 研究结果显示,F9947菌株是一种弱嗜盐菌,最适生长盐度为2.5%。进一步研究发现,该菌在25℃、振荡频率120 r/min、发酵初始pH值为6.0、接种量5%、72~120 h内收获时活性最强;发酵培养基配方为蛋白胨0.4%、酵母提取物0.4%,牛肉膏1%葡萄糖1%。 16S rDNA序列扩增、比对及构建进化树显示F9947与Bacillus subtilis strain BFAS的进化位置最接近,它们的相似性高达99.67%,因此鉴定其为枯草芽孢杆菌。生理生化特性的研究显示该菌有着陆地枯草芽孢杆菌的一些基本特征。 按最适发酵条件摇瓶发酵得菌液共30 L,离心除菌体后,该菌液显示对稻瘟霉极好的抗性作用,其最大活性稀释倍数为1:256。30 L上清依次用等体积乙酸乙酯、正丁醇分别萃取三次,减压蒸干,分别得到乙酸乙酯浸膏10.3 g和正丁醇浸膏48.2 g,经稻瘟霉检测,最小活性浓度分别为7.8μg/mL和0.98μg/mL。对乙酸乙酯浸膏经反复硅胶柱色谱,以氯仿-甲醇梯度洗脱,然后通过HPLC纯化制备,共得到了28个化合物,利用核磁共振和质谱等技术,适当辅以一定的物理、化学手段,13个结构已确定,它们分别为:cyclo(D-Pro-D-Ile)、cyclo(L-Pro-L-Val)、cyclo(L-Pro-D-Leu)、cyclo(L-Val-L-Leu)、cyclo(D-Pro-D-Phe)、cyclo(L-Ala-L-Ile)、cyclo(L-Ala-L-Leu)、cyclo(Gly-Tyr)、Uridine、cyclo(L-Pro-L-Ala)、cyclo(L-Ala-L-Phe)、cyclo(Gly-Ala)、cyclo(Ala-Gly-Ser-Val-Gln-Tyr-Pro-Asn-Gly-Asn-Gly)。其中,cyclo(Ma-Gly-Ser-Val-Gln-Tyr-Pro-Asn-Gly-Asn-Gly)为首次发现的新化合物。 药理学研究发现,环十一肽对胰腺癌细胞1990和肝癌细胞hul-7也都具有一定的抑制效果,ED_(50)分别为2.12μg/mL和3.22μg/mL。以上所有化合物均显示出很强的抗稻瘟霉活性,MIC<1μg/mL。据文献报道cyclo(D-Pro-D-Ile)、cyclo(L-Pro-D-Leu)及cyclo (D-Pro-D-Phe)具有较强的抗鳗弧菌(Vibrio anguillarm)活性,MIC分别为:0.05μg/mL、0.12μg/mL、0.03μg/mL。cyclo(L-Pro-L-Val)具有抗生素和植物性毒素能力,cyclo(L-Ala-L-Leu)具有病毒抑制活性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 林岳夫;海洋三所筛选到有抗艾滋病毒的海洋微生物[J];海洋信息;2005年01期
2 ;喝口海水等于吞下千种微生物[J];科技与经济画报;2006年03期
3 温少红;海洋微生物DHA研究概况[J];中国海洋药物;2002年01期
4 ;南海海洋所973项目获批立项:实现零的突破[J];广东科技;2010年07期
5 张守忠;;微生物制造了云?[J];百科知识;2009年20期
6 姜健,杨宝灵,鲁红凯,元起,桂佳,关圩秀;海洋微生物生物活性物质的研究[J];云南大学学报(自然科学版);2004年S2期
7 ;书讯[J];生态学杂志;2005年01期
8 方曦;杨文;;海洋石油污染研究现状及防治[J];环境科学与管理;2007年09期
9 柯为;;注视微生物胶源的研发[J];微生物学通报;2006年04期
10 力文;海洋微生物的未知世界[J];国外社会科学文摘;2003年03期
11 ;深海探秘:海底发现“阿凡达”[J];科技传播;2010年17期
12 杨雪松;李丽;刘红全;;海洋微生物几丁质酶的研究进展[J];安徽农业科学;2011年16期
13 黄维真;苏国成;方金瑞;;由海洋微生物产生抗生素的研究概况[J];微生物学杂志;1988年02期
14 ;全球海洋微生物普查发现大量新基因[J];海洋世界;2007年04期
15 刘玲枝;黄惠琴;鲍时翔;;海绵共附生微生物的研究新进展[J];生物技术通报;2007年03期
16 任虹;崔承彬;;海洋微生物抗肿瘤活性产物研究进展[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2010年05期
17 陈皓文;海洋微生物降解油污物的若干生态学问题[J];环境科学;1980年02期
18 李盛英,郑忠辉;国外海洋抗肿瘤活性物质的研究与开发[J];海洋通报;2003年02期
19 田黎,陈杰,何运转,田玲;农用抗生素的新资源——海洋微生物[J];中国生物防治;2003年03期
20 金彬明;刘佳明;;海洋微生物有机磷降解酶的纯化与性质研究[J];中国微生态学杂志;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 肖春;洪葵;;海洋微生物抗真菌活性物质研究[A];中国海洋生化学术会议论文荟萃集[C];2005年
2 朱峰;陈忻;黄美珍;;混合培养技术在南海海洋微生物独特代谢物发现中的应用[A];中国化学会第八届天然有机化学学术研讨会论文集[C];2010年
3 穆军;缪辉南;焦炳华;;国内外海洋微生物来源抗生素研究进展及方法学分析[A];中国海洋生化学术会议论文荟萃集[C];2005年
4 薛德林;胡江春;马成新;刘金永;王烈;刘丽;王书锦;;海洋微生物农药——宁康霉素的研制与应用[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
5 杨桥;张晓玲;代俊;张文俊;吴文惠;缪辉南;焦炳华;;海洋微生物产类胡萝卜素的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
6 朱伟明;;海洋微生物天才菌株的筛选及其次生代谢产物研究[A];中国化学会第七届有机化学学术会议图文摘要集[C];2011年
7 申毅;邹建华;戴均贵;马英丽;;海洋微生物土曲霉的代谢产物研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
8 郭刚;洪葵;胡申才;肖春;阎莉萍;郑服丛;;海洋微生物抗稻瘟菌活性菌株的筛选[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
9 熊利霞;李建中;孔繁祚;;南戴河和天津大港地区海洋微生物的分离与杀虫活性筛选[A];微生物生态学研究进展——第五届微生物生态学术研讨会论文集[C];2003年
10 朱伟明;朱天骄;顾谦群;方玉春;刘培培;;海洋微生物中抗肿瘤等活性先导化合物的发现[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冀世奇;海洋微生物高通量培养和分选技术的建立及应用[D];中国海洋大学;2011年
2 胡申才;具细胞毒活性海洋微生物的分离筛选及次级代谢物的研究[D];华中农业大学;2005年
3 韩小贤;海洋微生物代谢产物抗肿瘤活性成分研究[D];中国海洋大学;2005年
4 陈荫;四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究[D];中国海洋大学;2012年
5 吕家森;海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及菌株B2817活性物质的研究[D];华南热带农业大学;2005年
6 姚遥;五种海洋微生物次级代谢产物的研究[D];沈阳药科大学;2007年
7 朱洪平;中国东海海洋微生物环肽类活性物质研究[D];第二军医大学;2007年
8 孙玉雯;抗生素抗性筛选组合技术拓展放线菌药源活性菌株资源的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
9 朱鹏;珍珠膜海绵共附生微生物PKS与NRPS的筛选与模块结构研究[D];浙江大学;2008年
10 吴少杰;从胶州湾海洋放线菌中发现的新型星形孢菌素等7种新结构化合物[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭刚;海洋微生物抗稻瘟菌(Pyricularia grisea)活性菌株的筛选[D];华南热带农业大学;2003年
2 张清丽;海洋来源放线菌B2202的抗肿瘤活性成分研究[D];中国海洋大学;2004年
3 张庆华;海洋微生物(97F49)抗癌活性成分的研究[D];沈阳药科大学;2006年
4 杨向科;海洋细菌S-12-86的多相分类鉴定及其所产溶菌酶的性质和应用[D];中国海洋大学;2005年
5 周旭华;舟山地区嗜盐菌及产胞外多糖菌株的研究[D];浙江大学;2006年
6 朱九滨;红树林生态环境抗肿瘤活性放线菌的筛选及太空诱变育种[D];华南热带农业大学;2005年
7 尹晓斐;分子印迹聚合物的制备及固相萃取性能研究[D];国家海洋局第一海洋研究所;2008年
8 张秀明;海洋微生物高通量分离培养技术的建立及青岛近海微生物多样性研究[D];中国海洋大学;2009年
9 孙佳;大西洋、太平洋和印度洋微生物数量、生物量、多样性及其生态特征[D];国家海洋局第三海洋研究所;2008年
10 吕虎;海洋微生物抗真菌活性菌株的分离及Aspergillus sp.H075抗真菌蛋白的纯化[D];湖北大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 丁雷;辽宁省海洋微生物工程技术研究中心揭牌[N];大连日报;2010年
2 记者  卞晨光;大部分海洋微生物种类并不为人所知[N];科技日报;2006年
3 美仙;厦门海洋微生物新药工程技术研究中心获准组建[N];医药经济报;2006年
4 ;海洋微生物普查发现大量新基因[N];新华每日电讯;2007年
5 徐娜;“不毛之海”是海洋微生物宝库[N];中国海洋报;2004年
6 林岳夫;从海洋微生物筛选到抗艾滋病毒菌株[N];中国海洋报;2004年
7 本报记者 赵亚平;虾兵蟹将派上新用场[N];科技日报;2007年
8 ;海洋微生物有望用来治理赤潮[N];新华每日电讯;2006年
9 记者 林岳夫;海洋微生物菌种平台通过验收[N];中国海洋报;2006年
10 本报记者 游雪晴;海洋会成为人类未来的药房吗?[N];科技日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978