收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

腹部开放伤合并海水浸泡大鼠肠屏障功能损害的初步研究

刘刚  
【摘要】: 研究背景 肠屏障功能障碍(Intestine barrier functional disturbance,IBFD)是机体在各种临床危重病、外科手术及严重创伤后的常见并发症,具有较高的发病率,其发生机制尚未完全清楚。目前认为,应激状态下肠黏膜的急性病变涉及肠黏膜保护机制的削弱、损伤因素相对增强以及机体神经内分泌功能失调等诸多方面,是多因素综合作用的结果。肠黏膜屏障损伤及其介导的病理学改变使病情进一步加重。细菌或内毒素可经多途径发生易位,造成肠道细菌易位(bacterial translocation,BT)和肠源性内毒素血症(intestinal endotoxemia),进而启动全身炎症反应综合征(SIRS)并引起多器官功能障碍综合征(MODS)。研究发现,肠道血运障碍、肠道传输功能受损、炎症介质过度释放、氧自由基损伤、免疫功能损害以及肠黏膜上皮细胞凋亡等因素可能在肠屏障功能损伤机制中起着重要作用。保护肠屏障功能对改善预后具有重要意义。 海上作战时伤员落水并浸泡在碱性、高渗海水中是极常见的现象,这是一种严重的应激状态。前期的研究发现,战伤合并海水浸泡具有以下特点:血液出现高钠血症、高氯、高渗状态,以及严重的水、电解质紊乱,伴有代谢性及呼吸性酸中毒。严重的血流动力学紊乱、血液高凝状态、微循环障碍等,极易引发MODS。在海战伤救治的过程中,已经发现有海水浸泡对消化道屏障的破坏,是阻碍成功救治的难题之一。深入研究腹部开放伤合并海水浸泡对肠屏障功能的影响,为有效综合防治IBFD找出相应的对策,是降低早期伤后死亡率不可缺少的重要环节,也是本研究的目的。 目的 1.建立腹部开放伤合并海水浸泡大鼠模型,观察海水浸泡后大鼠血浆DAO、D-乳酸、LPS及肠道细菌易位的变化和肠黏膜组织形态学改变,确定大鼠肠屏障功能变化情况。 2.探讨腹部开放伤合并海水浸泡大鼠肠屏障功能损害的机制:观察肠蠕动速率的变化,肠组织MDA、SOD的含量,血浆TNF-α、IL-6的水平,肠道内容物SIgA、血浆IgA的变化及肠黏膜上皮细胞凋亡的情况。 方法 1.选择健康雄性Wistar大鼠50只,体重230±20g,清洁级,按照随机化原则分组,每组10只,分组情况如下:A组:腹部开放伤合并海水浸泡组(腹腔开放伤后浸泡于人工海水中);B组:单纯腹部开放伤组(单纯腹部开放伤后直接观察而不浸泡于海水或生理盐水);C组:单纯海水浸泡组(大鼠麻醉后未行任何手术,直接将腹部浸泡于人工海水中);D组:腹部开放伤合并生理盐水浸泡组(腹腔开放伤后浸泡于生理盐水中);E组:正常对照组(未行任何处理)。 2.在腹部开放性创伤和人工海水浸泡双重应激情况下,在应激1小时后,分别用分光光度法检测腹部开放伤合并海水浸泡大鼠血浆DAO和D-乳酸;动态浊度法检测血浆LPS;实验动物脏器细菌定量培养观察细菌易位情况。 3.按Haglund等评估小肠黏膜上皮损伤指数的方法,光学显微镜下观察肠黏膜组织病理学改变,透射电镜下观察肠黏膜组织超微结构变化。 4.采用活性炭标记法测定大鼠肠道蠕动速率,分光光度法检测肠组织MDA和SOD,酶联免疫吸附测试(ELISA)法检测血浆TNF-α、IL-6、IgA和肠道内容物SIgA。 结果 1.血浆D-乳酸活性检测:腹部开放伤合并海水浸泡组(A组)大鼠血浆D-乳酸活性(7.63±0.72 mg/L)、单纯腹部开放伤组(B组)血浆D-乳酸活性(5.46±0.57mg/L)、腹部开放伤合并生理盐水浸泡组(D组)血浆D-乳酸活性(4.97±0.95mg/L)较正常对照组(E组)大鼠血浆D-乳酸活性(4.06±0.39 mg/L)显著升高(P<0.01),单纯海水浸泡组(C组)血浆D-乳酸活性(3.89±0.55mg/L)较E组无显著差异(P>0.05);与B组比较,D组血浆D-乳酸活性无显著差异(P>0.05),A、C组血浆D-乳酸活性有显著差异(P<0.01)。 2.血浆DAO活性检测:大鼠血浆DAO活性A组(6.24±1.54 KU/L)、B组(3.57±1.65 KU/L)、C组(0.42±0.04KU/L)、D组(3.40±1.58KU/L)较E组(0.36±0.04 KU/L)均显著升高(P<0.01);而与B组比较,D组无显著差异(P>0.05),A、C组有显著差异(P<0.01)。 3.血浆内毒素水平检测:大鼠血浆内毒素水平A组(486.5±116.1 pg/ml)、B组(344.5±51.5 pg/ml)、D组(338.7±54.4 pg/ml)较E组(23.5+10.4 pg/ml)显著升高(P<0.01),C组(23.0±11.7pg/ml)与E组无显著差异(P>0.05);与B组比较,A、C组血浆内毒素有显著差异(P<0.01),D组无显著差异(P>0.05)。 4.实验动物脏器细菌定量培养:结果显示,正常动物在无菌条件下采集的血浆标本和其他脏器匀浆液标本经细菌培养后,没有菌落出现;A、B、D组血浆、肝脏及肠系膜淋巴结细菌培养后均可见大量菌落出现;与B组相比,A组和D组血培养及肝脏培养菌落数显著上升,且A组结果最高,肠系膜淋巴结培养,D组菌落数显著减少,A组菌落数无明显差异。 5.小肠黏膜组织形态学观察及评分:C、E组肠黏膜未见损伤,光镜下黏膜结构完整,小肠绒毛上皮完整、细胞排列整齐;A、B、D组均引起多部位的不同程度的肠道损伤,小肠绒毛顶端水肿、间隙增宽;部分区域上皮细胞萎缩,细胞核固缩、碎裂,胞浆嗜酸性变;固有膜毛细血管扩张,红细胞凝聚;淋巴管扩张,淋巴管内淋巴细胞聚集。小肠黏膜损伤评分值分别为:A组(5.10±0.74);B组(2.20±0.78);C组(0.20±0.42);D组(2.50±0.71);E组(0.20±0.42)。A、B、D组损伤程度评分显著高于C、E组(P<0.01);与B组比较,A组肠黏膜组织损伤程度明显加重(P<0.01),B组和D组间无显著差异(P>0.05)。 6.小肠组织电镜观察:透射电镜下,C、E组大鼠肠上皮细胞微绒毛结构完整,排列整齐,胞浆内含大量线粒体,结构完整,嵴清晰;A、B、D组肠道损伤后肠上皮细胞微绒毛变短,排列不整齐,线粒体肿胀明显,部分嵴溶解消失,较大空泡形成;部分细胞核固缩,核膜表面凹凸不平,染色质集聚于核膜周边形成新月形或环形,呈凋亡的形态改变。 7.肠蠕动速率检测:检测肠蠕动速率活性炭标记法简单准确。大鼠肠道蠕动速率A组(15.36±1.63%)显著下降(P<0.01),其蠕动速率只为E组(77.94±3.68%)的20%。B组(22.94±0.95%)、C组(32.34±3.58%)、D组(21.30±3.56%)肠蠕动速率显著低于E组(P<0.01),与E组比较,腹部开放伤及海水浸泡能够非常显著地抑制肠道蠕动功能;与B组比较,D组无显著差异(P>0.05),A、C组抑制肠道蠕动功能有显著差异(P<0.01)。 8.血浆TNF-α浓度检测:大鼠血浆TNF-α浓度A组(105.20±21.17 pg/ml)、B组(68.43±20.09 pg/ml)、C组(67.77±16.57 pg/ml)、D组(57.25±14.21 pg/ml)较E组(40.24±10.29 pg/ml)显著升高(P<0.05);而与B组比较,A组血浆TNF-α浓度显著升高(P<0.01),C、D组无显著差异(P>0.05)。 9.血浆IL-6浓度检测:大鼠血浆IL-6浓度A组(207.76±42.26 pg/ml)、B组(136.37±27.57 pg/ml)、D组(143.58±33.76 pg/ml)较E组(94.98±17.84 pg/ml)显著升高(P<0.05),C组(107.02±26.09 pg/ml)较E组无显著差异(P>0.05);而与B组比较,A、C组血浆IL-6浓度有显著差异(P<0.05),D组无显著差异(P>0.05)。 10.肠内容物SIgA含量检测:与E组(99.6±16.7 mg/L)比较,A组(32.26±7.57mg/L)、B组(65.08±10.07 mg/L)、D组(45.84±9.41 mg/L)肠道内容物SIgA含量显著减少(P<0.01),C组(89.98±11.14 mg/L)无显著差异(P>0.05);与B组比较,A、C、D组肠道内容物SIgA含量有显著差异(P<0.01)。 11.血浆IgA含量检测:与E组(61.73±17.44 mg/L)比较,A组(32.10±10.84 mg/L)、B组(43.62±10.12 mg/L)、D组(38.68±12.98 mg/L)血浆IgA含量显著减少(P<0.01),C组(65.84±8.18 mg/L)无显著差异(P>0.05);与B组比较,A、D组无显著差异(P>0.05),C组有显著差异(P<0.01)。 12.大鼠肠组织MDA含量检测:腹部开放海水浸泡后,肠上皮细胞应激反应造成肠组织MDA含量明显增加;与E组(2.76±1.97 nmol/mg pro)比较,A组(4.70±1.17 nmol/mg pro)、B组(3.14±0.65 nmol/mg pro)、D组(4.37±1.32 nmol/mgpro)大鼠肠组织MDA含量显著升高(P<0.01),C组(2.13±1.08 nmol/mg pro)大鼠肠组织MDA含量无显著差异(P>0.05);与B组比较,A、C、D组大鼠肠组织MDA含量有显著差异(P<0.05)。 13.大鼠肠组织SOD含量检测:腹部开放伤合并海水浸泡后,肠上皮细胞应激反应造成肠组织SOD含量明显减少;与E组(4.31±1.40 NU/mg pro)比较,A组(1.57±0.34 NU/mg pro)、D组(2.05±0.43 NU/mg pro)大鼠肠组织SOD含量显著减少(P<0.01),B组(3.43±1.33 NU/mg pro)、C组(4.09±1.70 NU/mg pro)大鼠肠组织SOD含量无显著差异(P>0.05);与B组比较,A、D组大鼠肠组织SOD含量显著减少(P<0.01),C组大鼠肠组织SOD含量无显著差异(P>0.05)。 14.小肠黏膜上皮细胞凋亡检测:TUNEL法显示,凋亡细胞主要位于小肠绒毛顶部,且随致伤程度的加重有由上向下发展的趋势。C、E组小肠黏膜绒毛顶部可见少量阳性凋亡细胞。A、B、D组小肠黏膜绒毛及隐窝上皮细胞凋亡明显增多。小肠黏膜上皮细胞凋亡指数的变化分别为:A组(45.60±7.0),B组(22.10±3.6),C组(5.10±0.6),D组(24.66±3.5),E组(4.51±0.7)。C、E组小肠黏膜上皮细胞凋亡指数呈现低水平;A、B、D组小肠黏膜上皮细胞凋亡指数均显著高于C、E组(P<0.05);与B组比较,A组小肠黏膜上皮细胞凋亡指数显著增高(P<0.01),D组无显著差异(P>0.05)。 结论 1.大鼠腹部开放伤合并海水浸泡动物模型制作成功;腹部开放伤及腹腔海水浸泡双重应激可引起IBFD,肠黏膜通透性增高;出现肠源性内毒素血症和细菌易位,成为创伤后肠源性感染及多器官功能障碍综合征(MODs)发生的原因之一。 2.腹部开放伤合并海水浸泡大鼠肠道蠕动功能明显受到抑制,出现肠道动力障碍,肠道传输功能受损是肠源性内毒素血症和细菌易位的原因之一。 3.腹部开放伤合并海水浸泡可导致大鼠肠黏膜屏障功能受损,TNF-α、IL-6等炎症介质及氧自由基参与了腹部开放伤合并海水浸泡继发性炎症反应过程及肠道黏膜细胞损伤。 4.腹部开放伤合并海水浸泡大鼠肠道免疫功能下降。大量的肠黏膜上皮细胞凋亡是细菌易位和肠源性内毒素血症的重要机制之一。肠道局部免疫功能的紊乱可能是引起整个机体免疫功能紊乱的原因之一。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 罗真东,吴印爱,刘献棠,王志伟,谢尚奎,胡世雄;早期应用头孢菌素类抗生素对腹腔海水浸泡伤大鼠的救治研究[J];中国急救医学;2003年12期
2 王志伟,吴印爱,刘献棠,蒋邦好,罗真东,胡世雄;腹腔海水浸泡对大鼠肠粘膜屏障功能的影响[J];中华航海医学与高气压医学杂志;2003年03期
3 王志伟,吴印爱,刘献棠,卢中荣,谢尚奎,金浩生;腹部开放伤并海水浸泡对腹腔内脏功能的影响[J];华南国防医学杂志;2001年04期
4 姜福亭,王育红,段蕴铀,杨兴东,何远翔,虞积耀,王大鹏;犬腹部开放伤合并人工海水浸泡后水、电解质的变化[J];创伤外科杂志;2003年05期
5 王育红,虞积耀,段蕴铀,杨兴东,姜福亭,何远翔,王大鹏;犬腹部开放伤合并人工海水浸泡后重要器官的病理变化[J];创伤外科杂志;2004年01期
6 罗真东,吴印爱,刘献棠,王志伟,谢尚奎,胡辉莹;腹腔海水浸泡对失血性休克犬血浆电解质水平的影响[J];中国急救医学;2003年07期
7 王育红,杨兴东,虞积耀,姜福亭,何远翔,王大鹏,段蕴铀;犬肠管破裂伤合并海水浸泡后血流动力学及病理学变化[J];解放军医学杂志;2004年12期
8 虞积耀,赖西南;海战伤合并海水浸泡伤的伤情特点及救治技术研究进展[J];解放军医学杂志;2004年12期
9 杨兴东,王育红,段蕴铀,何远翔,姜福亭,虞积耀,王大鹏;实验犬多部位伤海水浸泡后血流动力学变化[J];创伤外科杂志;2004年04期
10 吴印爱,王志伟,刘献棠,谢尚奎,蒋邦好,罗真东,胡世雄;腹腔海水浸泡伤的救治效果[J];华南国防医学杂志;2002年03期
11 姜福亭;赖西南;王育红;杨兴东;虞积耀;王大鹏;;应用防水三角巾对腹部开放伤犬海水浸泡后血液动力学变化的影响[J];山东医药;2008年14期
12 曲佳;张达矜;熊鸣;乔媛媛;王大鹏;安怀杰;赵晓航;;不同温度海水浸泡对腹部开放伤大鼠生存时间的影响[J];中国卫生检验杂志;2009年07期
13 韩善桥;虞积耀;刘刚;姜涛;王大鹏;;大鼠腹部开放伤合并海水浸泡血浆内毒素水平的变化[J];中国卫生检验杂志;2009年11期
14 王志伟,吴印爱,刘献棠,孙红宇,柳忠美,谢尚奎,金浩生,胡莹;犬腹腔开放伤并海水浸泡对血液动力学的影响[J];创伤外科杂志;2002年S1期
15 何远翔,王育红,段蕴铀,虞积耀,杨兴东,姜福亭,王大鹏;海水浸泡多发伤动物模型的建立[J];创伤外科杂志;2003年05期
16 王志伟,吴印爱,刘献棠,谢尚奎,蒋邦好,胡世雄,胡莹;腹腔海水浸泡伤实验犬的早期救治研究[J];中国急救医学;2002年10期
17 王大鹏,李辉,王育红,虞积耀;腹部开放性损伤合并海水浸泡时血浆酶的变化[J];中国比较医学杂志;2003年04期
18 张达矜;曲佳;熊鸣;乔媛媛;王大鹏;马聪;虞积耀;赵晓航;;海水浸泡对腹部开放伤大鼠凝血系统影响的研究[J];中国卫生检验杂志;2009年08期
19 韩善桥;虞积耀;刘刚;姜涛;王大鹏;胡明;;大鼠腹部开放伤后海水浸泡对肠道细菌的影响[J];实用预防医学;2009年05期
20 罗志安,黄强,蒲涛,郭旭;海水浸泡小腿绞轧伤的处理[J];临床骨科杂志;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹令;石冰;;战伤合并海水浸泡组织损伤机制及治疗进展[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
2 易朝辉;王甲汉;马军;李志清;;烫伤合并海水浸泡后创面局部处理措施探讨[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
3 马军;王甲汉;李志清;易朝辉;;大鼠烫伤合并海水浸泡后创面病理学改变的特点[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
4 马军;王甲汉;李志清;易朝辉;;大鼠烫伤合并海水浸泡后机体血栓素和氧自由基含量变化特点及机理探讨[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
5 陈璧;董茂龙;唐建兵;丁国斌;朱红军;;纳米烧烫伤敷料对被海水浸泡后的Ⅱ°烧伤创面的作用效应[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
6 李辉;鹿尔驯;虞积耀;孙笑非;王育红;王大鹏;马聪;;早期救治对胸部开放伤后海水浸泡所致肺损伤的影响[A];2001年全国中西医结合急救医学学术会议论文集[C];2001年
7 虞积耀;;海战落水伤员的伤情特点及早期救治原则[A];第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2005年
8 高志;方先业;;平时开放性腹部损伤的临床特点和处理[A];中华医学会急诊医学学会第六次全国急诊医学学术会议论文汇编[C];1996年
9 张贞良;贺顺龙;谢培增;汪先兵;;抗生素在海上环境下海战伤中的应用研究[A];共铸医药学术新文明——2012年广东省药师周大会论文集[C];2012年
10 周德敏;何仁洋;杨永;刘长征;肖勇;;埋地压力管道检测方法选择的探讨[A];压力管道技术研究进展精选集——第四届全国管道技术学术会议[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 胡晓红;胸部开放伤后海水浸泡致急性肺损伤发病机制和早期干预的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 蔡卫华;海水浸泡脊髓损伤的实验研究及便携式药物注射泵的研制[D];第二军医大学;2005年
3 朱雄伟;蛋白酶激活受体-2与海水浸泡伤后急性胃黏膜病变关系的研究[D];第二军医大学;2004年
4 沈宏亮;左氧氟沙星羧甲基壳聚糖缓释微球的研制及其对海水浸泡创伤的早期治疗作用[D];第二军医大学;2004年
5 周长喜;海水淹溺肺损伤肺水通道蛋白1、5的表达及意义的实验研究[D];第三军医大学;2008年
6 丁珌;福建红树林昆虫群落及主要害虫综合治理技术研究[D];福建农林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡媛琴;腹部开放伤合并海水浸泡致犬急性心力衰竭的实验研究[D];第三军医大学;2009年
2 张志勇;人促红细胞生成素对腹部开放伤大鼠经人工海水浸泡后所致急性肾损伤的保护作用[D];第三军医大学;2009年
3 王长生;海水浸泡肢体开放性软组织损伤对骨外膜的影响的初步研究[D];安徽医科大学;2010年
4 刘敏;开放骨缺损海水浸泡感染后人工骨修复的实验研究[D];第四军医大学;2011年
5 陆丹;海水浸泡开放性犬颅脑爆震伤影像学变化及机制实验研究[D];第四军医大学;2010年
6 刘刚;腹部开放伤合并海水浸泡大鼠肠屏障功能损害的初步研究[D];第二军医大学;2008年
7 卢青军;海水浸泡火器伤合并失血性休克伤情特点及温度、渗透压对其的影响[D];第三军医大学;2002年
8 田君;大鼠二次脑损伤合并海水浸泡后脑组织SOD、MDA变化的实验研究[D];福建医科大学;2010年
9 杨立斌;海水浸泡兔开放性颅脑创伤的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
10 詹刚;海水浸泡烧冲复合伤的伤情特点及早期救治的实验研究[D];第三军医大学;2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 蒋荣耀;变脸 那些容易受伤的国家[N];深圳商报;2008年
2 记者 符安平通讯员 陈康柏 陈超明;遂溪县农业部门及时采取措施抢救[N];湛江日报;2008年
3 李宏伟;创伤的急救程序[N];农村医药报(汉);2008年
4 付岩;膝关节疼痛用沙疗[N];医药养生保健报;2009年
5 记者 姜平;引淡冲咸 贴息贷款 免交地租[N];珠海特区报;2008年
6 双京 柳筠;前沿新知[N];大众科技报;2000年
7 翟玉专 宋亚娉;海关网络监管显奇效[N];国际商报;2003年
8 塘检;为了贸易各方的合法权益[N];中国国门时报(中国出入境检验疫报);2000年
9 记者 金毅 李倩;亲历魔鬼训练[N];浙江日报;2010年
10 消宣 本报记者 陈鹏 刘晓文 本报评论员;烈焰油海中的壮丽人生[N];大连日报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978