收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黄芩素抗白念珠菌的作用机制研究

黄杉  
【摘要】: 近年来,随着艾滋病的广泛传播,癌症的放疗、化疗,器官移植后免疫抑制剂的使用,广谱抗生素的大量使用,以及导管等越来越多的生物材料应用于人体,真菌感染率的不断增加,尤其以白念珠菌的感染最为普遍。全球很多中心检测统计资料表明,1996至2002年期间,在系统性真菌感染病例中,白念珠菌感染占50%-60%。由于长期广泛地预防性和治疗性使用唑类抗真菌药物(如氟康唑),白念珠菌的耐药现象越来越普遍,耐药程度也越来越高,日益严重的耐药现象和有限的治疗药物使白念珠菌感染成为临床上迫切需要解决的问题。 黄芩素(黄芩苷元,Baicalein,BE)是从唇形科植物黄芩的干燥根中提取的有效成份之一。黄芩是常用中药,其味苦、性寒,归肺、心、肝、胆、大肠经,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。黄芩素具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒等药理活性,且对血液细胞及肝脏细胞等正常细胞无毒性。虽然有研究报道黄芩素具有抗真菌活性,但由于其活性较弱,一直未应用于临床。鉴于目前白念珠菌普遍的多药耐药现象,本课题从联合用药角度出发,探索治疗白念珠菌感染的新策略。 本课题首先采用微量液基稀释法考察黄芩素对白念珠菌的抑制作用,并以棋盘式微量稀释法测定黄芩素与氟康唑合用对白念珠菌的抑制作用。其结果显示:黄芩素单独使用时对敏感型白念珠菌具有抑制作用,其有效抗菌浓度为1μg/ml-2μg/ml,但对氟康唑耐药的白念珠菌无效。黄芩素与氟康唑合用于敏感型白念珠菌时,氟康唑的MIC80值在合用后均有降低,黄芩素的MIC80值在合用后有50%菌株呈现降低,但所有受试菌株的FIC指数均0.5,两药相互作用表现为无关。在对氟康唑耐药的白念珠菌中,氟康唑与BE合用显示出显著的协同作用,原本对氟康唑耐药(MIC80≥64μg/ml)的菌株变得敏感,合用BE后氟康唑的MIC80值降低了32至1028倍,MIC80值分别在≤0.125至2μg/ml之间;BE的MIC80值也明显下降,受试菌株的FIC指数位于0.037-0.098之间,两药相互作用表现为协同。 应用Time-kill curves实验对临床耐药白念珠菌0603433进一步验证氟康唑与黄芩素合用的协同作用。菌液起始浓度选用体外药敏实验的1~5×103CFU/ml和时间-杀菌曲线常用的1~5×105CFU/ml。当菌液起始浓度为1~5×103CFU/ml时,药物作用24h后,16μg/ml黄芩素单用对生长曲线没有影响,未见抗菌作用,其曲线与对照组生长曲线几乎重合。10μg/ml氟康唑显示较弱的抑菌作用,合用16μg/ml黄芩素24h后则大大增强了抑菌效果,表明两药合用具有协同抑菌作用。当菌液起始浓度为1~5×105CFU/ml时,单用16μg/ml黄芩素或单用10μg/ml氟康唑对生长曲线都没有明显的抑制作用,两药合用24h后,菌浓度比单用氟康唑明显下降。 在对氟康唑耐药的白念珠菌中,以棋盘式微量稀释实验考察了BE与咪康唑、酮康唑的抗真菌相互作用。结果表明,咪康唑和酮康唑与BE合用均具有显著协同作用,合用BE后两者的MIC80值全部降到0.5μg/ml以下,FIC指数均0.5,两药相互作用表现为协同。另外,BE与两性霉素B(Amphotericin B,AmB)合用具有协同抗真菌的作用。合用BE后两性霉素B的MIC值由1-2μg/ml降到0.062以下,明显提高了两性霉素B的杀菌作用。但对于近平滑念珠菌和光滑念珠菌中,黄芩素与氟康唑合用FIC值均在1.5以上,表现为相互作用无关。 为了比较正常的与经黄芩素处理的白念珠菌生物被膜形态差异,以FUN-1和ConA染色后,激光共聚焦显微镜观察显示:正常生物被膜中含有大量菌丝,经8μg/ml黄芩素处理的生物被膜明显受到抑制,结构疏松,菌丝成分明显减少,极易从附着物上脱落。将不同浓度的黄芩素处理白念珠菌,48小时后XTT法测定生物被膜的生长动力学,结果表明,4μg/ml至32μg/ml的黄芩素可对白念珠菌生物被膜的抑制率达70%,2μg/ml的黄芩素对白念珠菌生物被膜的抑制率为15%,1μg/ml的黄芩素对白念珠菌生物被膜生长几乎无抑制作用。 刮取经不同浓度的黄芩素处理的白念珠菌,测定CSH值,结果可见,在黄芩素浓度为32μg/ml时,白念珠菌的CSH值最小,为0.11,随着BE浓度的降低,CSH值逐渐增大,呈现出剂量依赖性,经1μg/ml BE处理的白念珠菌CSH值为0.85。采用实时定量RT-PCR法测定白念珠菌CSH相关基因CSH1的mRNA表达水平,结果表明,与对照组相比,经黄芩素处理的白念珠菌CSH1 mRNA表达水平明显下降。 将不同浓度的黄芩素处理白念珠菌SC5314,12h后以流式细胞仪测定细胞凋亡率,同时采用已知真菌细胞凋亡诱导药物两性霉素B(AmB)作为阳性对照。结果显示,与空白对照组相比,黄芩素可明显诱导白念珠菌细胞凋亡,4μg/ml、8μg/ml黄芩素分别可诱导10%及20%的细胞凋亡。DAPI染色进一步确证了白念珠菌细胞凋亡的发生。应用透射电镜技术观察8μg/ml黄芩素作用于白念珠菌后细胞超微结构的变化。在白念珠菌的正常细胞超微结构中,细胞形状规则,细胞膜和细胞壁完整、光滑、边界清晰可见,胞核形完整,染色质均匀分布。经8μg/ml黄芩素处理的白念珠菌细胞核异常,染色质固缩,向核四周凝集,细胞质中有空泡产生,另外分裂细胞多处于两细胞粘连状态。 另外,黄芩素对白念珠菌细胞内ROS产生的促进作用具有剂量依赖性,并随着时间的延长对ROS产生的促进作用也随之增强。32μg/ml黄芩素处理48h后ROS产生量是对照组的5倍。将16μg/ml的黄芩素处理白念珠菌SC5314,于不同时间点测定线粒体膜电位,同时以两性霉素B作为阳性对照。结果显示,与空白对照组相比,黄芩素可明显降低白念珠菌线粒体膜电位,经黄芩素处理12h的白念珠菌线粒体膜电位下降至未经处理组一半值。经32μg/ml黄芩素作用3h后,CAP1、SOD2及TRR1的mRNA表达水平明显上调,尤其是CAP1基因上调了近24倍,SOD2和TRR1基因的表达也分别上调了3倍和9倍。由于黄芩素可诱导白念珠菌氧化应激相关转录因子CAP1的mRNA高表达,本实验考察黄芩素对野生型菌(CAF2-1)、CAP1基因敲除菌(CJDADH)及高表达菌(CJDCAP1)细胞存活率的影响,结果显示,经32μg/ml黄芩素处理3h后,CJDADH、CAF2-1和CJDCAP1的存活率分别为35%、41.7%和54%。 基因芯片杂交实验结果表明,黄芩素作用于白念珠菌以后,可引起多种相关基因的上调或下调,差异基因功能主要涉及细胞周期、跨膜物质转运、毒力因子及热休克蛋白等。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘振桐,王承敏;阿齐霉素与头孢他啶联用对铜绿假单胞菌生物被膜作用的研究[J];中国呼吸与危重监护杂志;2004年05期
2 谢轶,杨维青,贾文祥,程曦,曾蔚,杜艳,李学如,张再容;铜绿假单胞菌耐药性在生物被膜形成过程中的变化[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年04期
3 雷兆文;呼吸道的生物被膜病:慢性难治性肺部感染的关键环节[J];国外医学.呼吸系统分册;1997年04期
4 李乃静,李胜岐,孙勇海;改进平板法建立克雷白杆菌生物被膜[J];辽宁药物与临床;2001年03期
5 郑璐;余加林;;白色念珠菌生物被膜及其耐药机制研究进展[J];儿科药学杂志;2009年03期
6 王向党;鲁燕侠;严莲珍;;葡萄球菌属生物被膜对于抗菌药物敏感性的影响[J];中华医院感染学杂志;2010年03期
7 王根录;挪威疥伴皮肤白念珠菌感染2例[J];中国皮肤性病学杂志;1995年02期
8 王玲;;舌痛36例临床分析[J];工企医刊;1997年01期
9 王睿,裴斐,柴栋,朱曼,方翼,王中孝,刘皈阳;克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J];中国抗生素杂志;2002年05期
10 张姝娜;郭生玉;李胜岐;;肺炎克雷伯菌生物被膜豚鼠肺感染模型建立的实验研究[J];中国微生态学杂志;2008年04期
11 徐志豪!310009杭州,刘富光!310009杭州,王选锭!310009杭州,原双晋!310009杭州,李丽红!310009杭州;红霉素、磷霉素对铜绿假单胞菌生物被膜体外作用的研究[J];中华结核和呼吸杂志;2001年06期
12 刘晓琰,施安国;细菌生物被膜的研究现状[J];中国临床药理学杂志;2002年04期
13 方向群,刘又宁,王睿,陈迁;阿奇霉素对氟罗沙星治疗生物被膜导致实验动物感染的增效作用[J];中华医院感染学杂志;2002年07期
14 李鸿雁,夏前明,李福祥,全燕;克林霉素对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J];解放军医学杂志;2004年10期
15 胡晓凤;黎瑞春;;白念珠菌致新生儿骨损害一例[J];中国新生儿科杂志;2007年03期
16 郭宁如;吴绍熙;;念珠菌与口腔白斑病[J];国际皮肤性病学杂志;1991年06期
17 吴玮;陈岚;;念珠菌感染与耐药的研究现况[J];中日友好医院学报;2005年06期
18 陈小东,岳文香;克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制及对环丙沙星的增效作用[J];复旦学报(医学版);2002年04期
19 王霞;细菌生物被膜及相关感染[J];华西医学;2003年01期
20 李鸿雁,夏前明,李福祥,全燕;呼吸道生物被膜病[J];西南军医;2005年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王岗玲;毛雅云;;莫西沙星治疗耐多药结核近期疗效观察[A];中国防痨协会结核病控制专业委员会学术研讨会论文集[C];2008年
2 李玉财;;乌兰察布市耐多药结核病人状况分析[A];中国防痨协会结核病控制专业委员会学术研讨会论文集[C];2008年
3 曹俊敏;杨雪静;王原;李俊杰;;评估VITEK-2 Compact在检测葡萄球菌克林霉素诱导性耐药中的作用[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
4 王星;陈向东;于成安;李晓光;;初始耐药肺结核59例疗效分析[A];2004年中国防痨协会临床基础专业委员会学术会议论文集[C];2004年
5 谢振民;;化疗年代耐药肺结核病的分析与对策[A];2004年中国防痨协会临床基础专业委员会学术会议论文集[C];2004年
6 文东;张艳君;;阿德福韦酯联合云芝菌胶囊治疗拉米夫定耐药患者的近期疗效观察[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年
7 王虹;王省良;彭华国;周东耀;万成松;;拉米夫定耐药的临床和实验研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
8 成军;;加强乙型肝炎病毒耐药的认识和监测[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
9 李向群;陈静;夏珍;张祖荣;倪惠莉;梅建;;上海市历年现患菌阳肺结核病例未治愈影响因素调查分析[A];中国防痨协会结核病控制专业委员会学术研讨会论文集[C];2008年
10 徐丽慧;王贤军;王敏敏;董晓勤;;肺炎链球菌大环内酯药物耐药性及耐药基因erm、mef的检测[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄杉;黄芩素抗白念珠菌的作用机制研究[D];第二军医大学;2009年
2 曹颖瑛;白念珠菌生物被膜形成相关基因的功能研究[D];第二军医大学;2005年
3 陈炜平;黄芩素抗骨性关节炎的作用及其机制研究[D];浙江大学;2011年
4 汪洋;猪链球菌生物被膜形成及致病机理研究[D];南京农业大学;2011年
5 王娜;嗜水气单胞菌浮游态和生物被膜状态比较蛋白质组学及相关蛋白特性分析[D];南京农业大学;2012年
6 孔晋亮;氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜作用的体外和体内研究[D];广西医科大学;2010年
7 张丽艳;黄芩潜在功能的逻辑发现及实验研究[D];辽宁中医药大学;2013年
8 彭青;黄芩素与β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的协同抗菌作用研究[D];汕头大学;2010年
9 王荔;Cid/Lrg调节系统对表皮葡萄球菌临床株生物被膜形成的调控机制的研究[D];天津医科大学;2012年
10 李妍;双联苄化合物riccardin D抗念珠菌生物被膜研究[D];山东大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邓高荣;还原叶酸载体(RFC)在人骨肉瘤组织中的表达与临床意义[D];青岛大学;2005年
2 樊伟;慢性髓系白血病STI571耐药中PTP活性检测和Bcr-Abl基因ATP结合区的测序分析[D];第一军医大学;2005年
3 张克;乙型肝炎病毒体外感染胎肝细胞及阿德福韦耐药的初步研究[D];第一军医大学;2005年
4 杨雯;上皮性卵巢癌新辅助化疗的临床研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
5 陈建敏;滋养细胞肿瘤误诊为异位妊娠临床分析[D];浙江大学;2009年
6 王宇平;影响核苷类似物疗效的HBV基因结构与功能的研究[D];福建医科大学;2005年
7 王会妍;ERCC1及ATF-2与卵巢上皮性癌顺铂化疗耐药关系的研究[D];天津医科大学;2006年
8 杨转移;脑肿瘤干细胞化疗药物敏感性的实验研究[D];中南大学;2007年
9 刘海生;急性白血病患者bFGF/FGF-R1的表达及其预后意义和与凋亡、耐药的关系[D];河北医科大学;2002年
10 何建明;NF kappa B在肺腺癌群集耐药作用机制的研究[D];第三军医大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 驻京记者 王丹;逆转肺结核耐药难题[N];医药经济报;2009年
2 记者郑灵巧通讯员梅姗;发现国内艾滋病耐药毒株[N];健康报;2002年
3 记者 曹静;上海地区细菌越来越耐药[N];解放日报;2000年
4 邯郸市传染病医院 李强;科学抗病毒 预防乙肝耐药[N];大众卫生报;2009年
5 程文沁;真菌耐药困局寻解[N];医药经济报;2009年
6 葛宗渔;专家讲授乙肝预防耐药之秘诀[N];光明日报;2008年
7 姜晓凌;耐药 并非乙肝治疗不可跨越障碍[N];上海科技报;2008年
8 金泉;“预防耐药”是首选策略[N];文汇报;2008年
9 本报记者 白毅;耐药时代 优化抗菌药治疗的几条途径[N];中国医药报;2009年
10 张建松;华凌磊;将“遏制抗菌药耐药”进行到底[N];中国医药报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978