低分子肝素抗炎性凝血效应对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

【摘要】： 【目的】 1.动态观察盲肠结扎穿孔(cecal ligation puncture, CLP)脓毒症模型大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group boxl portein,HMGB1)mRNA和蛋白表达水平,研究低分子肝素对肺组织HMGB1基因和蛋白表达的影响,探讨低分子肝素对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其可能机制,为脓毒症患者器官功能保护提供新的理论依据 2.观察低分子肝素对脓毒症大鼠血浆TNF-a及IL-6的含量的影响,探讨低分子肝素对脓毒症早晚期炎症释放的作用。 【方法】 144只SPF级雄性成年SD大鼠(体重200-220g)被随机分为假手术组(48只)、盲肠结扎穿孔术(CLP)后常规治疗组(48只)及常规加低分子肝素治疗组(48只),分别施以假手术(A组)或CLP(B组和C组)。A组开腹后轻拉盲肠后将其回纳腹腔,逐层缝合腹壁,其余各组均采用CLP术制作大鼠脓毒症模型术后立即腹腔注射生理盐水(NS)2ml+头孢曲松(30mg/kg)(A、B组)；生理盐水(NS)2 ml+头孢曲松(30mg/kg)+低分子肝素(150 U/kg)(C组)。以术后3、6、12、18、24、48小时为观察点,观察各组大鼠术后活动、进食、竖毛、腹泻、眼球凹陷、呼吸等情况；于各观察点每组随机处死大鼠5只,每组留18只不杀用以观察5天生存率。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测肺组织]HMGB-1mRNA的表达；采用Western blot法检测肺组织HMGB-1蛋白的表达；采用酶联免疫吸附法测定血浆TNF-α及IL-6的含量：用分光光度比色法检测肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidese,MPO);热干法称取肺组织湿重/干重比值(Wetweight/Dry weight);并在活杀前行脓毒症大鼠评分。观察低分子肝素对脓毒症大鼠严重程度评分、生存时间、血浆TNF-α及IL-6的含量、肺组织HMGB1 mRNA与蛋白表达、MPO活性以及WW/DW比值的影响。 【结果】 1.A组各时间点脓毒症评分差异无显著统计学意义,B、C组脓毒症评分较A组同期水平明显升高(P0.01),从6h开始增高,24h达到高峰并维持至48h,48h评分仍显著高于组内6h(P0.05)；C组各时间点评分均显著低于B组同期水平(P0.05)。A、B、C组半数生存时间依次为120h、20.4h、28h；A、B、C两两组间差异均有统计学意义(P0.05)。 2.A组各时间点大鼠HMGB1mRNA和HMGBl蛋白均有微量表达,差异无统计学意义(P0.05)。B、C组HMGB1mRNA和HMGB1蛋白从6h开始表达增多,以12-24h为显著,48h开始下降但仍高于A组。C组同期水平较B组低(P0.05),但仍比A组高且有显著性差异(P0.05)。 3.A组大鼠血浆TNF-α水平在术后各时间点差异无显著性,B组大鼠血浆TNF-α水平于术后6h达到峰值,12h开始明显下降,24 h逐渐恢复至3h水平。C组各时间点血浆TNF-α水平低于B组(P0.05),但仍显著高于A组(P0.05)。A组大鼠血浆IL-6水平在术后各时间点差异无显著性,B组大鼠血浆IL-6水平于术后3h达到峰值,18h开始明显下降,24 h逐渐恢复至3h水平。C组各时间点血浆IL-6水平低于B组(P0.05),但仍显著高于A组(P0.05)。 4.A组各时间点MPO活性无明显差异,B组CLP后3小时MPO活性开始升高,24h达峰值,48h开始有所回落,但与A组同期水平差异仍有显著性(P0.05),C组较B组同期水平低(P0.05),但较A组显著升高(P0.05)。 5.A组肺组织WW／DW比值较B、C低,差异有显著性(P0.05),C组比值介于A组与B组之间,各组组间差异具显著性(P0.05)。 6.光镜下B组肺组织可见明显急性肺损伤表现：充血、水肿、炎症细胞浸润；C组较B组病理损伤明显减轻,且肺损伤病理评分明显降低(P0.05)。 【结论】 1.低分子肝素能够抑制CLP引起的脓毒症过程中的早晚期炎症介质释放。 2.低分子肝素能够显著抑制脓毒症大鼠肺组织HMGB1蛋白及mRNA水平表达；通过抑制肺组织HMGB1,下调脓毒症大鼠肺组织MOP活性,减轻肺组织PMN浸润,减缓CLP诱导的肺损伤程度,提高脓毒症大鼠的生存率。 3.低分子肝素对脓毒症引起的肺损伤的保护作用可能是通过其抗炎性凝血效应对凝血-炎症轴影响而实现的。