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肾透明细胞癌TCF19基因选择性剪接异构体的类型和表达特点

钱涛  
【摘要】: [目的]探索人肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)是否存在与细胞生长调节相关的转录因子19(TCF19)选择性剪接异构体,探索其表达特点及其与ccRCC发生的关系。 [方法]采用cDNA基因表达谱芯片研究实验室建立的汉族人能够无限传代的2株在动物模型中已证实具有转移潜能的RCC细胞系(RCC05-TXJ、RCC05-ZYJ)基因表达谱,从中选取TCF19为兴趣基因。通过选择性剪接数据库(Alternative Splicing Database,ASD)对基因TCF19可能存在的选择性剪接异构体进行预测分析。针对预测结果,使用Primer Premier 5.0及Oligo 6.0软件设计5种预测异构体的RT-PCR引物,进行PCR反应,将PCR产物凝胶回收,与pMD18-T载体连接,经α筛选后转染DH5α感受态细胞,菌液送测序,应用计算机软件进行序列的比对分析。经验证从组织中扩增的产物与生物信息学预测结果一致,确认为新的选择性剪接异构体后,设计Realtime引物,在32例原发癌组织及癌旁组织样本中定量检测TCF19-1、TCF19-3选择性剪接异构体的表达水平及差异。ccRCC原发肿瘤标本来源于2005年1月-2008年12月长海医院泌尿外科肾癌根治术的患者,其中包括32例ccRCC原位组织及其相应癌旁组织。男性22例,女性10例,平均年龄为52.86岁,最小年龄为36岁,最大为78岁,经病理证实,均为肾透明细胞癌。 [结果]ccRCC组织中存在两种新型TCF19替换剪接异构体(TCF19-1、TCF19-3)。Real-time RT-PCR检测结果发现这两种异构体在癌和癌旁组织中均表达,但TCF19-1在原发癌组织中表达率远高于癌旁组织(P0.05);TCF19-3在癌旁组织中的表达率略高于原发癌组织,但无统计学意义(P=0.082)。 [结论]首次发现ccRCC组织中存在两种TCF19选择性剪接异构体TCF19-1和TCF19-3,其中TCF19-1的表达可能与ccRCC有关。


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