收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

肺炎支原体及流感病毒快速检测方法的评估应用及探索研究

李雪辉  
【摘要】:目的: 肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)是一种常见的呼吸道感染病原,快速诊断困难。目前临床常用的检查手段为ELISA、被动凝胶颗粒检测抗体、PCR检测抗原等,但均不理想。近年来国内专家研发了一种MP快速鉴定培养基,本研究对这种快速鉴定培养方法进行了应用评估,同时对2009年全年收住北京军区总医院呼吸内科的住院患者进行了MP感染情况的流行病学调查。 流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,具有传染性强,蔓延快及波及面广的特点。2009年甲型H1N1流感病毒变异株给人们的生活、生产带了严重影响,发热门诊的流感样病例患者激增,为了快速筛查流感患者,我们对就诊的流感样病例患者进行了胶体金免疫层析检测(gold imunochrochromatographic assay, GICA)法的流感快速检测,为了更好的了解流感患者的临床特征,我们对进行GICA法快速筛查患者的基本资料、临床症状等进行了总结分析。同时,克隆和表达了甲型流感病毒的M1蛋白,为下一步改进GICA法检测流感病毒的敏感性和特异性进行了初步探索性的研究。 方法: 1.2008年12月1日到2009年3月1日收住北京军区总医院呼吸科的患者,共132例,(男64例,女68例)。采集患者入院后次日晨咽拭子即刻放入快速鉴定培养基进行MP培养,同时抽取静脉血,离心取血清,应用被动凝集检测试剂盒检测患者血清MP抗体。最后收集培养后咽拭子快速培养基进行MP基因片段PCR扩增,并行常规细菌、真菌培养鉴定。 2.2009年1月到2009年12月收住北京军区总院呼吸科的各种急性呼吸道疾病患者500例(男300例,女200例),采集患者入院后次日晨静脉血,分离血清,应用被动凝集检测试剂盒检测患者血清MP抗体,同时结合患者的临床资料,分析MP感染人群、季节及各疾病种类的感染情况。 3.从2009年5月到2010年1月北京军区总医院发热门诊共接诊成人患者约8000余例,其中对7804例流感样症状患者进行了GICA法甲流快速检测。本研究对其临床资料进行了总结、整理、分析。 4.从NCBI中查找甲流病毒的M1基因,并设计引物,提取H5N1的病毒RNA,反转录后,扩增全长,并连接到PET32a原核表达载体中,转化入大肠杆菌BL21(DE23),应用适当的条件对其进行诱导表达,并对诱导表达的融合蛋白进行western blot验证。 结果: 1.132例患者咽拭子MP快速培养,41例结果阳性。对快速培养MP后的培养基进行MP基因片段的普通PCR扩增检测,结果显示:41个MP培养阳性的培养基,仅有1个培养基中MP基因PCR扩增阳性。培养结果阴性的培养基,MP基因扩增全部为阴性。故两种方法阳性符合率仅为2.5%,阴性符合率为100%。 对MP快速培养后的50个培养基进行了MP基因片段real-time PCR扩增,(其中包括25个MP培养阳性,25个培养阴性的培养基),结果仅有6个MP培养阳性的培养基PCR扩增MP基因片段为阳性,且含量极低,两种方法相比,阳性符合率为24%,阴性符合率100%。两种方法的一致性检验kappa值仅为0.24,即MP快速鉴定培养法与PCR检测方法一致性不高。 快速培养MP阳性的培养基,经纯化培养、鉴定均未发现有细菌菌落,但存在至少两种真菌生长。 MP快速培养法与MP抗体被动颗粒凝集检测法相比,两种检测方法kappa值仅为0.34,一致性不高。 2.以MP抗体滴度≥1:80作为患者感染MP的标准,2009年1月至2009年12月,共检测500例患者,其中176例患者检测MP阳性,感染率为35.2%。第一季度和第四季度的MP感染率较其它季度稍高,但各季度、各月份之间差异无显著性意义。将500例患者分为4个年龄阶段,对各年龄段MP感染率进行分析,小于40岁年龄组MP感染率明显高于其它三组患者,大于80岁年龄组的MP感染率明显低于其它三组,差异有显著性意义。40至60岁和60至80岁组患者的MP感染率差异无显著性意义。 以抗体滴度≥1:160作为患者MP近期急性感染的指标,则检测的500例患者中有105例为近期感染。近期感染组的年龄与其他抗体滴度组相比,年龄相对较小,差异有显著性意义。MP近期感染患者中,约29.5%为慢性肺部疾病加重(包括慢性支气管炎、哮喘、支气管扩张、间质性肺疾病),36.2%为肺炎,14.3%为支气管炎。 3.2009年5月到2010年1月在甲流大流行期间,应用GICA法对北京军区总医院发热门诊7804例流感样症状患者进行了流感筛查,其中202例患者GICA法检测流感阳性,占检测人群的2.59%。其中检出甲型流感患者171例,乙型流感患者24例,甲、乙流感混合感染患者7例。流感的高发季节主要为夏季和秋季,感染人群多为青壮年,主要临床症状为发热、咽痛、鼻塞、打喷嚏、流鼻涕、关节酸痛。 4.成功构建了PET32a/M1原核表达质粒,并用western blot对融合蛋白的表达进行了验证。 结论: 1.MP快速鉴定培养基的配方在抗真菌方面还有待进一步改进,否则会对结果造成影响。 2.呼吸内科住院患者全年均有MP感染,第一季度和第四季度感染率稍高,但各季度MP感染率差异无显著意义;MP感染人群主要为青壮年,多为肺炎和支气管炎。在慢性肺部疾病的患者中,MP感染可能是引起患者病情急性加重住院的因素之一。 3.从2009年5月到2010年1月,流感病毒感染主要在夏季和秋季,临床表现为发热、咽痛、鼻塞、流涕,但仅根据临床症状无法判断是否为流感病毒感染。GICA法快速检测流感病毒抗原操作简便,快捷,在流感流行时可用于大量流感样病例筛查。 4.成功构建了甲流病毒M1蛋白的原核表达系统,为利用M1蛋白抗体建立甲流的GICA诊断方法,进一步提高其敏感性和特异性进行了探索性研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 谢世营;张旋;韦升市;冉健;;肺炎支原体快速液体培养的方法评价[J];临床和实验医学杂志;2007年04期
2 李满元;;四种肺炎支原体检验方法临床应用价值比较[J];中国民康医学;2011年14期
3 张昊;;肺炎支原体快速液体培养法与被动凝集法的应用比较[J];辽宁医学杂志;2010年06期
4 钱月芳;唐进;陆敏;;肺炎支原体的3种实验室检查方法对照分析[J];临床肺科杂志;2009年11期
5 周雪梅;童晓;;小儿支原体肺炎应用肺炎支原体快速鉴定培养基快速诊断及临床分析(附118例报告)[J];哈尔滨医药;2007年05期
6 康炜,郑顺玉,李雯,牛建伟;快速培养检测肺炎支原体的临床价值[J];现代检验医学杂志;2003年03期
7 王楠;张国成;许东亮;;95例肺炎支原体快速液体培养阳性标本分析[J];现代生物医学进展;2010年08期
8 高树云;俞雪梅;;盛泽地区2002年~2006年小儿呼吸道支原体感染流行病学分析[J];中国血液流变学杂志;2008年04期
9 钱新宏;张国成;许东亮;;肺炎支原体快速鉴定培养基在儿童支原体感染快速诊断中的应用[J];现代检验医学杂志;2006年05期
10 王楠;张国成;刘芳;杨晓蕾;豆玉凤;;快速培养结合显微镜排除法检测肺炎支原体的研究[J];临床儿科杂志;2010年08期
11 黄康彻;小儿支原体肺炎70例临床分析[J];中国热带医学;2001年02期
12 汤恩婉,叶惠玲,朱临坪;小学生肺炎支原体抗体检测报告[J];中国卫生检验杂志;2004年02期
13 曹守理;;肺炎支原体[J];中国临床医生;1973年04期
14 肖奇明,尹本义,海镇环,郑智远,郭思健;成人下呼吸道肺炎支原体感染的检测及临床意义[J];湖南医科大学学报;1994年04期
15 黄建荣,吕火祥,周建英,盛吉芳;老年呼吸道肺炎支原体感染的临床研究[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1998年06期
16 李华,刘欧,高玉莲,李建英,刘知白;聚合酶链法检测肺炎支原体的临床分析[J];现代医药卫生;2000年02期
17 曾婕!330006南昌市;肺炎支原体所致频发早搏1例[J];实用医学杂志;2001年01期
18 薛春明,王世杰,郜爱青;肺炎支原体引起中枢神经系统损伤20例临床分析[J];河南实用神经疾病杂志;2002年03期
19 梁霞;小儿肺炎支原体感染90例临床分析[J];实用临床医学;2003年03期
20 刘建,彭东信,刘晓晴,朱朝霞,车东媛,赵时宇;肺炎支原体肺部感染大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子表达的免疫组化研究[J];中国人兽共患病杂志;2004年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张昊;;肺炎支原体快速培养法与被动凝集法的应用比较[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
2 曹彬;;肺炎支原体耐药机制研究与分子流行病学[A];第十届全国化疗药理暨抗感染药理高峰论坛资料汇编[C];2010年
3 窦东梅;曹健荣;张誌;;肺炎支原体IgM抗体检测试剂(胶体金法)[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
4 杨来智;吴润香;何涛君;邱羽;;连续4年临床肺炎支原体IgM抗体检测回顾性分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
5 何晓燕;王兴斌;张容;谭俊杰;邹琳;;肺炎支原体DNA检测在儿童呼吸系统感染性疾病中的临床意义[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
6 姜毅;李温慈;徐海滨;邵山鹰;;小儿肺炎咽拭子肺炎支原体培养及药敏分析[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
7 李国周;汤令群;;呼吸道感染患者肺炎支原体血清IgM抗体的检测[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
8 王玉水;王志华;;肺炎支原体大鼠肺泡灌洗液INF-γ的变化[A];第五届全国中西医结合变态反应学术会议论文集[C];2011年
9 曹彬;;肺炎支原体CAP临床研究[A];中华医学会第七届全国呼吸道感染学术大会暨第一届多学科抗感染治疗学术研讨会论文汇编[C];2011年
10 辛德莉;马红秋;王斯;韩旭;马少杰;陈小庚;;肺炎支原体耐药株的临床病例分析[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李雪辉;肺炎支原体及流感病毒快速检测方法的评估应用及探索研究[D];第三军医大学;2011年
2 刘杨;肺炎支原体耐药性及耐药机制研究[D];复旦大学;2010年
3 毛晓健;2005-2007年广州儿童医院住院肺炎患儿三种病毒感染的临床特征[D];南方医科大学;2010年
4 苑鑫;肺炎支原体耐药机制的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
5 黄海辉;社区获得性肺炎的病原学调查及抗感染治疗方案评价[D];复旦大学;2003年
6 黄海;社区获得性肺炎的病原学研究[D];第二军医大学;2005年
7 张子燕;双表法干预Ⅳ诱导小鼠肺炎模型及MYD88依赖通路的机制研究[D];辽宁中医药大学;2011年
8 余春梅;免疫缺陷小鼠人偏肺病毒感染特点[D];重庆医科大学;2010年
9 杨麒;好氧颗粒污泥快速培养及其去除生物营养物特性的研究[D];湖南大学;2008年
10 李应国;动物衣原体分子检测方法研究和诊断试剂盒的研制及应用[D];重庆大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵朋飞;小儿反复呼吸道感染与肺炎支原体关系的探讨及中西医结合治疗的临床研究[D];成都中医药大学;2010年
2 张立;儿童呼吸道标本肺炎支原体基因型研究[D];浙江大学;2011年
3 周云连;肺炎支原体耐药基因分析及其临床意义[D];浙江大学;2011年
4 宋海燕;一起青年学员急性传染性肺炎暴发的病因学探究[D];安徽医科大学;2010年
5 谷雅君;散在重复序列PCR检测肺炎支原体的方法建立及临床应用[D];天津医科大学;2010年
6 徐迎春;杭州地区儿童支原体肺炎流行特征与气象因素的相关分析[D];浙江大学;2010年
7 刘静;可溶性髓细胞表达触发受体1在肺炎患儿中的表达及临床意义[D];苏州大学;2011年
8 赵芝娜;肺炎支原体P1黏附蛋白基因的克隆与表达[D];中国医科大学;2004年
9 王洪波;采用实时定量PCR方法对儿童肺炎支原体血症进行诊断的研究[D];吉林大学;2010年
10 李书秀;Nested PCR法扩增16SrRNA基因动态检测肺炎支原体的临床意义[D];中国医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 北京朝阳医院呼吸科教授 曹彬 本报记者 魏平 整理;肺炎支原体检测:酶联免疫吸附试验较实用[N];医药经济报;2011年
2 刘宏;肺炎支原体引起的呼吸道感染[N];农村医药报(汉);2007年
3 河北省顺平县动物防疫监督站白云分站 赵正阳顺平县动物防疫监督站安阳分站 侯建库 靳建伟;猪气喘病的防治[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 上海仁济医院儿科教授 曹兰芳 通讯员/刘黎 沈一吟;儿童过敏可能与感染有关[N];上海中医药报;2009年
5 余木;PRDC和疫苗的效果[N];中国畜牧报;2005年
6 周英;支原体肺炎的诊治[N];农村医药报(汉);2006年
7 ;急性细菌性下呼吸道感染(一)[N];农村医药报(汉);2007年
8 本报记者 郎朗;京东方韩国液晶子公司“解套”[N];21世纪经济报道;2007年
9 ;阿奇霉毒片[N];农村医药报(汉);2006年
10 韩运双;此“非典”非彼“非典”[N];医药经济报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978