收藏本站
收藏 | 论文排版

Fas基因在顺铂诱导的人小细胞肺癌多药耐药中的作用研究

吴蔚  
【摘要】:研究背景: 小细胞肺癌在治疗初期对化疗药物很敏感,但往往在治疗后期表现出对药物的耐药。顺铂的细胞毒作用主要是顺铂与核蛋白连接,形成铂类药物与DNA链间或链内交联,以及DNA-蛋白质交联损伤。顺铂是临床上小细胞肺癌化疗常用的药物,然而对于许多患者来说,对顺铂产生的耐药性损害了顺铂的治疗效果。细胞的自我适应是造成肺癌耐药的主要原因:1.细胞膜上转运蛋白(P糖蛋白,多药耐药蛋白,肺耐药相关蛋白等)的增多使得胞吐作用增强,导致细胞内药物浓度下降;2.肿瘤细胞对抗肿瘤药物的解毒作用增强(例如谷氨酰胺转移酶增多);3.化疗药物作用的靶点蛋白发生了变化(如拓扑异构酶Ⅱ的减少)导致肿瘤细胞药物敏感性的下降;4. DNA修复功能得到增强(如ERCC1表达的增加);5.细胞中相关信号传导的不正常表达。凋亡信号传导的异常,例如:促凋亡基因Bax,Fas/FasL表达的下调或者抗凋亡基因Bcl-2表达的上调亦可以导致恶性细胞对化疗药物的抵抗。 Fas是一种分子量为45kDa的Ⅰ型穿膜蛋白,表达在不同种类普通细胞和恶性细胞(包括肺癌细胞)的细胞膜表面。其配体FasL多表达于激活的T细胞和一些恶性细胞细胞膜表面。当细胞外的FasL与细胞膜表面Fas发生三聚反应,Fas关联的死亡结构域(FADD)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(caspase 8)与胞内Fas的死亡结构域相结合,即可在细胞内诱导产生死亡信号,导致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的级联激活并最终导致细胞死亡。由于FasL可以诱导表达Fas的肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL系统在T细胞介导的细胞毒作用,肿瘤细胞介导的自分泌性自杀和旁分泌杀伤中扮演重要的角色。从另外一方面来说,肿瘤细胞可以通过下调其自身Fas的表达来避免被杀死。已有文献证明,对顺铂耐药的的肺癌细胞低表达Fas,相应的其凋亡率显著的下降。一些文献将肿瘤的多药耐药性与Fas基因表达的下降和Fas介导的凋亡下降相联系起来。这些文献发现对Fas介导的凋亡不敏感的肿瘤细胞同样对化疗药物也不敏感,这也许是因为由化疗药物诱导的肿瘤细胞死亡途径被打断的缘故。重新上调Fas基因是否能够逆转已对顺铂产生耐药的人类小细胞肺癌细胞的耐药性目前仍不是很清楚。如果上调Fas基因可以逆转已对顺铂耐药的人类小细胞肺癌细胞耐药性,那么其机制是什么,是改变了耐药基因的表达,还是对细胞信号传导产生了影响,这些都需要我们进一步的研究。 研究目的: Fas/FasL系统是凋亡的主要调节者,而在耐药的肿瘤细胞中,Fas基因一般低表达。目前,Fas基因在肿瘤细胞耐药机制中所起的作用尚不清楚,本研究拟上调Fas基因在对顺铂耐药的人小细胞肺癌细胞株(H446/CDDP)上的表达,然后观察H446/CDDP细胞耐药性、凋亡率,以及部分耐药基因和信号传导通路表达的变化情况,初步探索Fas基因在小细胞肺癌耐药机制中所起的作用。 研究方法: 1.通过逐步增加顺铂给药浓度的方法诱导对顺铂耐药的人小细胞肺癌细胞株(H446/CDDP),该细胞株同时也对其他一些化疗药物耐药。 2.构建含Fas基因的腺病毒载体。 3.将携Fas基因的腺病毒载体转染H446/CDDP细胞株。运用CCK-8法检测转染前后细胞对顺铂及其他化疗药物化疗耐药性的变化。 4.运用表达谱基因芯片、RT-PCR和Western blot法检测转染前后P170,MRP,TOPOⅡ,bcl-2,Bax,GST-π,ERCC1以及部分信号通路表达的变化;运用流式法检测转染前后凋亡率的变化。 结果: 1.成功诱导建立了对顺铂耐药的人小细胞肺癌细胞株(H446/CDDP),该细胞株对其他一些化疗药物也具有显著的耐药性(P0.01)。 2.在H446/CDDP细胞株中,基因芯片和RT-PCR检测发现包括一系列耐药和凋亡基因表达的改变,包括MRP、P170、GST-π、ERCC1、TopoⅡ、Bcl-2等耐药和凋亡抑制基因表达的显著上调,而Fas凋亡基因表达的显著下调(P0.01)。 3.在H446/CDDP细胞株中,基因芯片检测发现包括一系列信号通路表达的改变,包括PI3K、PKC、JAK-STAT、ERK和p38MAPK信号通路上调,JNK信号通路下调。 4.成功构建了Fas基因过表达的腺病毒载体,并成功利用携Fas基因的腺病毒载体将Fas基因转染入H446/CDDP细胞中,其可稳定的上调Fas基因在H446/CDDP细胞上的表达。 5.上调Fas基因在H446/CDDP细胞上的表达,可以显著恢复肿瘤细胞对顺铂和其他一些化疗药物的敏感性(P0.01)。 6.上调Fas基因在H446/CDDP细胞上的表达,可以显著增加肿瘤细胞的凋亡率(P0.01)。 7.上调Fas基因在H446/CDDP细胞上的表达,可以在mRNA和蛋白水平显著降低Bax,TopoⅡ,MRP,P170,GST-π和ERCC1的表达,显著增加Fas和bcl-2的表达(P0.01)。 8.基因芯片检测发现上调Fas基因在H446/CDDP细胞上的表达,可以引起PI3K、PKC、JAK-STAT信号通路的抑制,以及JNK和p38MAPK信号通路的激活。 结论: 1. H446/CDDP细胞不但对顺铂具有耐药性,也对其他一些化疗药物具有耐药性,其机制可能是:MRP,P170,GST-π,ERCC1,TopoⅡ等耐药基因表达的上调;凋亡基因Fas表达的下调;PI3K、PKC、JAK-STAT、ERK1/2和p38MAPK信号通路的激活,JNK信号通路的抑制。 2.本实验成功构建了携Fas基因的腺病毒载体,并将其转入对顺铂耐药的人小细胞肺癌细胞株H446/CDDP,建立了稳定高表达Fas基因的人小细胞肺癌细胞系H446/CDDP/Fas。 3. Fas在对顺铂耐药的小细胞肺癌细胞株中过表达可以在一定程度上恢复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是:降低了耐药基因MRP,P170,GST-π,TopoⅡ和ERCC1等的表达;上调Fas基因表达;抑制PI3K、PKC、JAK-STAT信号通路激活,激活JNK和p38MAPK信号通路。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨俊霞,汤为学;人肝癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征[J];癌症;2002年08期
2 黄守国,孔北华,杨瑞芳,江森;人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立(英文)[J];中国现代医学杂志;2003年23期
3 李宏,赵丽嫣,乔新民;卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立[J];大连医科大学学报;2001年01期
4 侯魁元;费洪新;孙丽慧;卢勇;;白藜芦醇对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP及亲代细胞作用的研究[J];齐齐哈尔医学院学报;2008年02期
5 王华斌,郑伟;紫杉醇、顺铂对绒癌耐药细胞抑制作用的观察[J];齐齐哈尔医学院学报;2002年09期
6 周向东;钱桂生;刘凌志;;采用基因芯片技术筛选人小细胞肺癌SH77/CDDP多药耐药相关基因表达谱的研究[J];第三军医大学学报;2007年04期
7 张瑞芬!100021北京,罗贤懋!100021北京,魏慧娟!100021北京;金属硫蛋白ⅡA过表达对乳腺癌细胞耐药性的影响[J];肿瘤防治研究;2001年04期
8 李宏,赵丽嫣,张松平;卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药机制的研究[J];中国实用妇科与产科杂志;2001年08期
9 周向东,钱桂生,刘凌志;人小细胞肺癌SH77多药耐药细胞系的建立及其生物学特征分析[J];第三军医大学学报;2003年16期
10 黄薇,李力,唐东平,陈心秋,黎丹戎;人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立、耐药机制的研究[J];中国癌症杂志;1998年03期
11 高贵洲;王建军;石思恩;;P型铜转运ATP酶(ATP7B)在肺腺癌细胞株A549中的表达与顺铂耐药的关系[J];中国肺癌杂志;2009年04期
12 王平康,陈登庭,冯笑山,郭福军,何跃明,艾中立,周亚魁;磁性顺铂微球肝动脉栓塞的实验研究[J];洛阳医专学报;1994年01期
13 胡长坤,曹世龙,黄抗美;正交设计法在研究放射合并顺铂和干扰素对鼻咽癌细胞增殖影响中的应用[J];数理医药学杂志;1994年03期
14 毛雪华,范南峰,黄诚;枢复宁控制顺铂引起恶心呕吐的临床疗效[J];实用癌症杂志;1994年04期
15 孙红;;顺铂胸腔内注射治疗恶性胸腔积液疗效观察[J];苏州医学院学报;1995年06期
16 胡大武,吉林,许国辉,陈君辉,席晓秋,张果林,肖瑞君,李 ,王静波;15例中晚期肺癌大剂量顺铂双路化疗并同步放疗的近期疗效观察[J];中国肿瘤临床;1996年04期
17 张宇雁,张峻,沈建乐,肖永来,高明玉,李传祖,杨彬,李维林,李绍莉,王芬;控制顺铂引起恶心呕吐的临床体会[J];肿瘤;1996年S2期
18 郑景德,张志玲;顺铂为主的联合方案治疗晚期食管癌疗效观察[J];齐鲁肿瘤杂志;1996年04期
19 邸石,伍岫云,陈惠祯;顺铂和环磷酰胺联用治疗卵巢上皮性癌28例[J];医药导报;1998年04期
20 亓放,张宝泉,徐炎,高翠华;顺铂诱导的喉癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响[J];中华医学杂志;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李昆霖;吴国明;戢福云;黄桂君;;人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆研究[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
2 朱海涛;;人小细胞肺癌原位瘤与皮下瘤模型影像及病理对比研究[A];中华医学会第十八次全国放射学学术会议论文汇编[C];2011年
3 周晓健;陈万涛;林李嵩;何荣根;;顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 吴琳;刘翠霞;孔繁斗;袁宏;张学军;谷玲;吕申;;顺铂对雌性大鼠骨代谢影响的实验研究[A];纪念卓越的人民医学家林巧稚大夫诞辰100周年——全国妇产科高级学术论坛论文集[C];2001年
5 周建华;史晓宇;白玉贤;;奈达铂联合5-FU和顺铂联合5-FU治疗晚期食道癌的近期疗效对比观察[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
6 梁颖;陈丽昆;林勇斌;杨群英;王志强;徐光川;;紫杉醇联合顺铂每周方案治疗老年晚期非小细胞肺癌临床观察[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
7 张文军;王莉;李红英;;薏苡仁油联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床研究[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
8 张翠丽;王青山;赵秀兰;谢克勤;;大蒜油联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞生长的影响[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
9 卢永科;仲来福;;水飞蓟素对顺铂所致肾损害的保护作用[A];中国营养学会第四届老年营养学术会议论文摘要汇编[C];1999年
10 马兰;汪荃;苳红;李越;耿丹;于秋菊;;恩丹西酮两种治疗方案对顺铂的止吐作用观察[A];第八届全国中西医结合肿瘤学术会议论文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴蔚;Fas基因在顺铂诱导的人小细胞肺癌多药耐药中的作用研究[D];第三军医大学;2010年
2 刘丽萍;间皮素在卵巢上皮性癌诊断、病情监测中的价值评价及在顺铂耐药中的作用和机制研究[D];河北医科大学;2011年
3 石思恩;人肺腺癌细胞耐顺铂系A549/CDDP的比较蛋白组学研究[D];华中科技大学;2010年
4 胡沙;EZH2在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2010年
5 郅克谦;nm23-H1提高顺铂化疗敏感性的实验研究[D];四川大学;2004年
6 彭小伟;顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药分子机制的初步研究[D];中南大学;2010年
7 徐玉生;TRAIL与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究[D];浙江大学;2005年
8 阴梅云;阿克拉霉素与顺铂合用对卵巢癌细胞抑制机理研究[D];河北医科大学;2003年
9 刘利维;基因重组野生型p53腺相关病毒治疗膀胱癌的实验研究[D];天津医科大学;2006年
10 汤勇;神经营养因子受体与顺铂诱导的耳蜗细胞毒性的相关性研究[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴冬;细胞外信号调控激酶1/2在曲谱瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞对顺铂耐药中的作用[D];第二军医大学;2007年
2 王攀;人胃癌顺铂耐药细胞系BGC-823/CDDP的建立及其耐药机制的初步研究[D];重庆医科大学;2005年
3 张珂;卵巢癌顺铂耐药靶向逆转的初步研究[D];山东大学;2005年
4 刘津;人鼻咽癌顺铂耐药细胞系(Tw03/DDP)的建立及其与肺耐药相关蛋白的关系[D];广西医科大学;2009年
5 张文韬;人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立及生物学特性研究[D];四川大学;2006年
6 徐志渊;人鼻咽癌耐顺铂细胞系的放射敏感性研究[D];汕头大学;2007年
7 吴翠芳;芦荟大黄素逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP耐顺铂的作用及机制的初步研究[D];中南大学;2007年
8 李高舜;顺铂联合蛋白酶体抑制剂杀伤骨肉瘤细胞的研究[D];浙江大学;2006年
9 夏姣娥;青蒿琥酯与顺铂联合对小鼠恶性黑色素瘤的抗瘤作用研究[D];中南大学;2007年
10 李亚威;~(18)F-FDG PET/CT评价兔VX2移植瘤顺铂早期化疗反应的实验研究[D];山西医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;川大建成人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系[N];中国医药报;2006年
2 吴小川;冰片能促进顺铂通过血脑屏障[N];中国医药报;2002年
3 张伦;铂类药物的应用及市场分析[N];中国医药报;2001年
4 四川省肿瘤医院放疗科 徐珂;奈达铂化疗过敏一例[N];健康报;2005年
5 丁香园;发掘联合抗癌药物[N];健康报;2005年
6 晓艳;NT-3对抗化疗副作用[N];医药经济报;2002年
7 孙华君;非小细胞肺癌ERCC1蛋白主导的DNA修复与以顺铂为主的辅助化疗疗效的关系[N];医药经济报;2006年
8 ;治疗老年小细胞肺癌患者 全剂量顺铂/依托泊苷+来格司亭疗法比减量疗法更有效[N];医药经济报;2005年
9 张伦;铂类抗癌药:化疗生力军[N];中国医药报;2003年
10 吴一福;泰索帝与顺铂联用治疗肿瘤[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978