收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

酪氨酸羟化酶基因转染神经干细胞及表达

邱克军  
【摘要】: 帕金森症(Parkinson's disease,PD)的基本病理改变为中脑黑质多 巴胺能神经元进行性坏死,同时神经元内多巴胺合成代谢过程中的限速 酶——酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)含量下降,其结果导致 纹状体区多巴胺含量的显著减少,引起各种临床症状。目前PD的非手 术治疗,以补充多巴胺合成的前体物质左旋多巴(L-3, 4-dihydroxyphenylalanine,L-dopa)为主,但随着疾病的发展,存活的多 巴胺能神经元及其酪氨酸羟化酶含量进一步下降,即使补充大量各类药 物,也难以达到满意疗效。因此,有效地增加纹状体区多巴胺能神经元的 数量,增强神经元合成多巴胺神经递质的能力,是治疗PD的关键措施。 在脑纹状体内移植多巴胺能组织,以提高脑内多巴胺神经递质的含量, 正发展成为一种新的治疗方法。脑内移植胚胎中脑组织治疗PD的效果 得到广泛确认,但是这种方法也存在一定的局限性,首先要同时获得数 个胎龄相似的用于脑内移植的胚胎非常困难,其次在伦理学上也存在激 烈的争论,在很大程度上限制了这种方法的广泛应用。为了增加纹状体 多巴胺的含量,研究者们将成纤维细胞、成肌细胞等经基因工程改造使 之表达酪氨酸羟化酶移植到纹状体内,增加多巴胺递质的含量,以达到 治疗PD的目的,但是这一类非神经源性细胞不能在宿主脑内长期存活, 不能与宿主脑神经发生神经整合,作用时间较短,效果仍不理想。因此, 寻找一种既能与宿主脑发生神经整合,在宿主脑内长期存活,又易于获 得,易于在体外培养增殖,便与进行基因操作,表达酪氨酸羟化酶的的 细胞供体源,用于脑移植治疗PD将有重要的意义。 自90年代初以来,学者们在对神经发育的研究中发现一类广泛存在 于哺乳动物CNS的未分化细胞。这类细胞具有自我分裂,自我复制,自 我更新及自我维持的能力,并具有多种分化潜能,研究者认为这一类细 胞属于神经干细胞(NeUral Stem cells,NSCs)。神经干细胞可在体外培养, 长期传代,大量增殖,在体外诱导因子的作用下可以分化发育为成熟的 各种神经细胞表型,尤其是分化成熟的神经元具有完整的电生理功能, 脑内移植后能长期存活,并与宿主脑细胞之间产生神经整合,建立起复 杂而广泛的突触联系。由于NSCs易于获得,在体外增殖迅速,便于进 行基因工程操作,是基因治疗CNS疾病的理想载体细胞。本研究中,我 们从胚胎 16天(Emb仰oic day 6,EI6)V让tar大鼠前脑室管膜下周围 区分离、鉴定、培养增殖了神经干细胞c同时,我们将缺陷性逆转录病 毒载体NZA与多巴胺合成的限速酶基因TH一起构建了表达质粒,然后 将该表达质粒转染PA3 I7细胞,收集经PA3I,包装产生的含TH-NZA具有 感染能力的逆转录病毒颗粒。并将收获的h-NZA病毒感染体外培养的 神经干细胞,诱导其分化后,用免疫荧光细胞化学的方法检测到了TH 基因在分化细胞内的表达。实验结果如下: 1.构建并扩增Th-NZA表达质粒。 2.分离、鉴定、大量增殖和搜集了 EI6 Wstar大鼠前脑室管膜下周 围区的NSCs。 3.建立了TH-N止转染NSCS的有效方法,探索了逆转录病毒表达 质粒转染NSCS的最佳条件。 4.以不同的条件在体外诱导NSCs分化为神经元和神经胶质细胞, 验证了所分离的NSCS具有多分化潜能c 5.证实了转染TH-N。A的NSCS分化为神经元及胶质细胞后都能有 效地表达TH,并且,NSCS的神经生物学特征不因TH-N。A的转染而发 生变化。 总之,本实验成功地进行了NSCs的分离、鉴定及体外培养,并完成 了重组逆转录病毒载体质粒N。A-TH对NSCS的转染,证实了TH在分化 细胞中的表达,我们认为可在体外培养,大量扩增,并容易进行h基因 转染,且能表达TH的NSCs可以作为脑内细胞移植治疗PD的供体源。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;德国马普学会发现非基因技术神经干细胞培育新方法[J];中国科技信息;2011年15期
2 刘伟;;神经干细胞研究进展及前景[J];科技信息;2011年16期
3 ;美国科学家通过细胞重组成功将细胞“转换”[J];广东农业科学;2011年09期
4 刘彩玉;王春芳;李鹏飞;蔚洪恩;龙志晶;邓春圣;;脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2011年03期
5 杨上川;董锦润;瞿家桂;胡新天;王正波;;一种有效区分移植细胞和宿主细胞脑损伤模型的建立[J];动物学研究;2011年04期
6 ;国际科技信息[J];中国科技信息;2011年17期
7 朱丽华;;干细胞研究进展消息[J];中国细胞生物学学报;2011年06期
8 ;科普新知[J];科技传播;2011年16期
9 彭文;;科技快递[J];百科知识;2011年18期
10 梁婧;徐立红;;蛋白磷酸酶2A对微管的调控作用研究进展[J];中国细胞生物学学报;2011年06期
11 肖娟娟;王秋桂;张敏海;;慢性复合应激对成年海马FGF-2的表达及神经发生的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2011年03期
12 李翠莹;安群星;陈要臻;陈晓鹏;;诱导性多能干细胞的研究进展[J];临床输血与检验;2011年03期
13 陈秋雷;陈彤;姜桦;;诱导性多潜能干细胞技术进展[J];生物学杂志;2011年04期
14 郭礼和;;人羊膜细胞临床前研究:在治疗神经损伤研究方面的进展[J];中国细胞生物学学报;2011年05期
15 郭礼和;赵刚;刘天津;;人羊膜细胞临床前研究:治疗神经退行性疾病方面的研究进展[J];中国细胞生物学学报;2011年06期
16 龙志晶;王春芳;李鹏飞;刘彩玉;邓春圣;呼钟理;;干扰骨髓基质细胞Hes1基因对Mash1基因表达的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2011年03期
17 陈慧;;胃蛋白酶为什么不水解自身[J];生物学通报;2011年03期
18 白海艳;吕军;张颖;计美珍;秦丹丹;;蛋白质磷酸化位点的识别[J];内蒙古工业大学学报(自然科学版);2011年02期
19 郑元涛;彭立新;姚辉璐;黄庶识;王桂文;;FTIR-HATR诊断α-地中海贫血[J];广西科学;2011年03期
20 吴娇;王辉;李小娜;梅文莉;戴好富;;槟榔果实中的细胞毒活性成分研究[J];河南大学学报(自然科学版);2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙一睿;胡锦;王尔松;奚才华;姚海军;;单层黏附培养技术在哺乳动物神经干细胞体外稳定增殖和多向分化中的应用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
2 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
3 田东萍;苏敏;吴贤英;张舸;;硒、B-27在神经干细胞球存活与分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
4 杨华静;徐鹏;张苏明;;低浓度β-淀粉样蛋白对神经干细胞的作用机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
5 文玉军;王登科;孙征;刘海洋;张莲香;秦毅;;成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
6 张波;王任直;;脑梗死后神经干细胞原位增殖及其机理的实验研究[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
7 邢雪松;吕威力;;Wnt-1在大鼠脑缺血再灌注海马组织内源性神经干细胞早期增殖分化中的作用[A];创新沈阳文集(B)[C];2009年
8 朱慧;李晓红;戚菁;施维;吴信华;陆玉华;鞠少卿;刘炎;;Pax3负性调控神经干细胞分化过程中胶质纤维酸性蛋白的表达[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
9 李革飞;李剑平;;应用流式细胞术检测神经干细胞表面标志物-Nestin[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
10 姚立松;刘天庆;葛丹;崔占峰;马学虎;;海藻酸钙微胶珠培养神经干细胞[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑敏;神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
2 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
3 李巍;神经干细胞的分化调控及BDNF基因修饰后对大鼠脊髓损伤修复的研究[D];第三军医大学;2002年
4 张力;人胚神经干细胞及骨髓基质细胞移植治疗帕金森病恒河猴模型的实验研究[D];复旦大学;2003年
5 戴宜武;骨髓基质细胞定向分化为神经干细胞及自体移植治疗中脑损伤研究[D];第一军医大学;2002年
6 张所军;神经干细胞向胶质瘤干细胞迁移及对其生长特性的影响[D];华中科技大学;2011年
7 张在金;神经干细胞移植治疗大鼠脑创伤的实验研究[D];第二军医大学;2005年
8 尹丰;人视网膜色素上皮细胞治疗帕金森病的实验与临床研究[D];第二军医大学;2006年
9 谭太贵;多通道PLGA脊髓再生介导管道治疗大鼠脊髓半横断损伤[D];天津医科大学;2006年
10 高国一;胎鼠脑神经干细胞鉴定纯化与生物学特性观察[D];第二军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邱克军;酪氨酸羟化酶基因转染神经干细胞及表达[D];第三军医大学;2001年
2 冯年花;人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的实验研究[D];南昌大学;2010年
3 宋精梅;比较新生大鼠脑部不同部位的神经干细胞被诱导分化为少突胶质细胞的差异[D];福建医科大学;2010年
4 李政;内皮祖细胞调控神经干细胞分化及其机制研究[D];第三军医大学;2010年
5 王念;绞股蓝皂苷对脊髓源神经干细胞体外培养的影响[D];陕西师范大学;2011年
6 刘朋;海藻酸钙/明胶微胶珠的制备及在神经干细胞培养中的应用[D];大连理工大学;2011年
7 郭兵;大鼠羊膜上皮细胞体外向类神经干细胞诱导分化及其移植后对视神经再生的作用[D];第二军医大学;2010年
8 吴珲;神经干细胞玻璃化冻存及其生物学特性的研究[D];大连理工大学;2011年
9 王培福;大鼠神经干细胞的培养和鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
10 刘孟宇;胶质瘤细胞条件培养基对神经干细胞迁移的影响[D];苏州大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 时仲省 高思敏;移植神经干细胞 瘫痪兔子可爬行[N];大众卫生报;2001年
2 王成应;能克隆的神经干细胞被分离[N];健康报;2004年
3 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
4 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
5 刘海英;脑癌源于脑下室区的神经干细胞[N];科技日报;2009年
6 刘霞;美将成人皮肤细胞变成神经干细胞[N];科技日报;2011年
7 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
8 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
9 记者 吴苡婷;为脑损伤患者治疗打开希望之门[N];上海科技报;2009年
10 本报记者 仇逸;突破坚冰[N];经济参考报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978