食管癌p73基因表达与突变的研究及临床意义

【摘要】： 食管癌是人类10种最常见的肿瘤之一，每年全世界新增病例30万，其中70％的病例均发生在我国。由于食管癌外膜缺乏浆膜层，肿瘤组织较快的侵袭到邻近组织，并且常转移至区域淋巴结和远处器官，尽管采用外科手术，放疗和化疗等措施，5年生存率仍仅有10％～34％。食管癌的形成是一个多因素、多阶段、长期相互作用于正常细胞恶性转化的过程，其中包含了一系列不同的基因异常与突变，这些异常和突变的不断积累，导致上皮细胞发生恶性转化。基因方面的变化主要可以慨括为原癌基因的激活以及肿瘤抑制基因失活这两个不同的方面。因此，对食管癌相关基因的研究，从分子生物水平阐释食管癌的发生、发展机制，为食管癌的早期诊断，以及开辟新的治疗手段，具有一定的临床意义。 p53基因是肿瘤领域众多相关的抑制基因中研究得最为广泛、最为系统的抑癌基因。在所有的人类肿瘤中，p53基因大约有50％的突变率。同样在食管鳞癌和食管腺癌中，尽管突变方式不同，但p53基因的突变发生率均高达80％。作为第一个被发现p53基因家族中的新成员—p73基因，与p53基因共同组成了一个抑癌基因家族，自1997年被发现以来，就倍受研究者的关注。业已研究表明：p73基因位于人类1号染色体短臂的着丝粒亚端1p36.33区域，该区域是多个抑癌基因位点；p73基因的转录产物与p53基因有2.5kb的同源碱基序列；在蛋白质水平上，p73与p53有3个功能区域相互对应，并且在DNA结合区中，p73的6个突变热点完全对应于p53，两者在功能上亦具有高度相似性，都能抑制细胞生长，诱导细胞调亡的功能，而且都主要是通过转录激活p21~(WAF-1)基因宋实现的。p73基因在人体内低水平广泛表达，通过RT-PCR方法在人脑、心、肝、脾、肾等器官组织中均可检测到p73基因的转录。然而在不同类型的肿瘤组织中，p73基因所扮演的角色并不相同，如在神经母细胞瘤，结肠癌，黑色素瘤，乳腺 癌等恶性肿瘤中P73基因频繁的丢失、突变，它的正常存在至关重要，是 重要的抑癌基因；而在肺癌中，P73基因的突变率很低，它并没有能够阻 止癌症的发生及恶化，所以没有担当主要的抑癌作用。这似乎预示了一个 论点，即P73基因作为抑癌基因，发挥抑癌作用，有一个组织特异性范畴。 到目前为止，人们对P73基因的了解还很有限，它的诸多功能、作用机理 一以及与的3基因的相互关系等许多方面还不十分清楚，还需进一步探导。 对食管癌肿瘤组织P73基因的研究，迄今为止，国内尚无报道，国外 也仅有两位学者进行了初步探讨。鉴于此，本研究对37例行手术切除的食 管癌住院患者，分别应用：①逆转录多聚酶链反应技术mT干CR）对p73 基因mRNA转录表达水平进行检测；②Western－bloting技术和③非标记抗 体免疫酶组化染色法（PAP法）对 P73蛋白在食管癌肿瘤组织、癌旁、远 一 癌组织，以及区域淋巴结中的表达进行定性、定位研究，并探讨与食管癌 临床病理特征的相互关系；④单链 PCR构象多态性叩CR七SCP）和⑤异源 双链体迁移率分析技术（HM）鉴定P73基因突变状况，进一步探明P73 基因在食管癌发生、发展中的角色和作用机制，为食管癌的基因治疗提供 一定的理论依据。 ”实验结果显示： l．RT－PCR检测的 37例食管肿瘤组织中有21例（51．8％）p73 mRNA 表达阳性，而癌旁组织中 6例（16．2％），远癌组织有 7例 （1．9％），25例 区域淋巴结中有3例门2．0％）表达阳性：食管癌组织与癌旁、区域淋巴结 和远癌组织中n73 mRNA表达率比较，具有显著性差异（n＜0．05）；而癌旁 组织、区域淋巴结与对应的食管正常组织之间以3mRNA表达率比较，均无 显著性差异（p＞0．05）。p73。RNA表达与食管癌临床病理特征之间的关系， 一包括食管癌TNM分期、病理类型、分化程度均无显著性差异h川．05人 2．Western－blot与免疫组化检坝p73蛋白表达，37例食管鳞状细胞 癌组织中有18例H8．叫）卜3蛋白检出阳性：而癌旁组织有2例（5．狐）； 远癌组织有 2例（5．4％）阳性，25例区域淋巴结中无 P73蛋白阳性表达。 食管癌组织与癌旁、区域淋巴结和正常组织中p73蛋白阳性检出率比较， IX 具有显著性差异（P＜0．05）；而癌旁组织、区域淋巴结与对应的食管正常组 织之间 P73蛋白阳性检出率比较，均无显著性差异…川．05＼ 同样，P73 蛋白阳性表达检出率与食管癌临床病理特征之间的关系均无显著性差异 （p＞0．05）。 3．PCR七SCP川MA迁移率检测结果均显示 P7 3基因在食管癌中未发现 任何突变。” 研究结果提示： 1．食管癌肿瘤组织中存在 P73基因的过度转录表达和 P73蛋白高阳性 检出率，提示p73基因可能参与了调控食管瘤的发生过程，但可能不是食 管癌肿瘤发生的主要分子事件。 2．食管癌组织中未发