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重组人可溶性B淋巴细胞刺激因子的制备及功能鉴定

高会广  
【摘要】: B淋巴细胞刺激因子(B-lymphocyte stimulator ,BLyS)是一种重要的肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员。它属Ⅱ型跨膜蛋白,通过与其受体结合而广泛参与T、B淋巴细胞增殖和功能的调节。研究证实,BLyS缺乏可导致免疫功能低下;而BLyS过表达则密切参与了多种自身免疫性疾病的发生和发展。因此,BLyS及其受体有望成为治疗免疫功能低下疾病和自身免疫性疾病时进行药物设计的新靶点。为此我们进行了人BLyS胞外区cDNA的克隆,重组表达质粒的构建,重组蛋白的诱导表达、纯化及生物学活性的鉴定,旨在为进一步研究和开发用于治疗自身免疫性疾病和免疫功能低下疾病的BLyS相关制剂奠定基础。该项研究取得的主要结果如下: 1. 经RT-PCR成功地克隆了编码人BLyS胞外区78-285和112-285的cDNA,经查对,与GenBank上登录的编码相应BLyS胞外区cDNA的序列完全一致。两序列被GenBank登录,登录号分别为AY129226 、AY129227。 2. 将测序正确的目的片段分别插入原核表达质粒pQE-80L,成功地构建了重组原核表达质粒pQE-80L/ BLyS78和pQE-80L/ BLyS112。 3. 上述质粒分别转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,均获得了较高水平的表达,并确立BLyS在大肠杆菌中高效表达的最佳诱导表达条件为终浓度1mmol/L的IPTG在37℃诱导表达4小时。SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小分别约为26kDa和21kDa,主要是以包涵体的形式存在。Western blot分析显示,分别在分子量约26kDa和21kDa处出现单一条带,而对照的菌体则无此反应。 4. 经Ni2+-NTA纯化系统及尿素分步透析,表达蛋白得到了有效纯化和复性。 纯化蛋白在SDS-PAGE上呈现单一条带,复性蛋白经Sephadex G75柱分析显示,以单体和三聚体两种形式存在。 5. 生物学活性分析显示,所制备的重组可溶性BLyS78-285和112-285不仅可刺激人外周血淋巴细胞增殖,而且还能刺激小鼠的脾淋巴细胞增殖。同时还证实BLyS可抑制单核白血病细胞系U937的生长。 功能性重组人可溶性BLyS的制备,为进一步研究BLyS的作用机制及研制新型BLyS抑制分子创造了条件,同时也为相关疾病的治疗性研究奠定了物质基础。


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5 华讯;美国将试验刺激免疫系统药物[N];医药经济报;2000年
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