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甘氨酸对缺氧和烧伤大鼠心肌的保护作用及其机制研究

周军利  
【摘要】:严重烧伤早期发生的“休克心”,是诱发或加重烧伤休克,导致其他组织器官缺血缺氧损害和功能障碍的重要原因,因此在烧伤早期实施有效的心肌保护措施对纠正休克、防治组织器官缺血缺氧损害具有重要意义。近年来的研究提出,游离的甘氨酸具有显著的细胞保护作用。甘氨酸可明显减轻缺血、再灌注所致的骨骼肌损伤;减轻细胞因子的释放及钙超载和氧自由基的产生;还能减轻内毒素血症,降低内毒素血症大鼠的死亡率。但甘氨酸是否对烧伤后心肌细胞具有保护作用及其作用机制尚未见报道。 本研究通过建立体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧模型和大鼠30%烧伤模型,从心肌的形态学、酶学等一系列指标的改变,以明确甘氨酸对缺氧和烧伤早期大鼠心肌损害的保护作用。然后通过观察体外培养的心肌细胞钙离子、膜电位及其受体的变化,探讨其保护作用机理。 材料与方法: 一、体外实验 1.模型与分组:离体培养的SD乳鼠心肌细胞,分为常氧组(N)、常氧加甘氨酸组(NG)、缺氧组(1%氧浓度)(H)、甘氨酸处理加缺氧组(GH组)、甘氨酸加anti-GlyRα_1多克隆抗体阻断剂加缺氧组(GHA)、甘氨酸加甘氨酸受体激动剂Taurine加缺氧组(GHT)。 2.观测指标和方法 (1) 缺氧1、3、6、12、24h后,取细胞培养上清液,紫外分光光度计测LDH、CK含量,缺氧6h后心肌细胞存活率采用台盼蓝排斥法。 (2) 离体培养的大鼠心肌细胞,采用特异荧光探针,在激光共聚焦下检测缺氧6h后心肌细胞游离钙及膜电位的变化。 (3) 心肌细胞甘氨酸受体α1亚基采用免疫组织化学荧光染色法检测。 二、动物实验 1.模型与分组:采用SD大鼠致成30%TBSAⅢ°烫伤模型,试验分为正常组(N)、


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