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骨形态发生蛋白-7及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的表达及延肾胶囊干预实验

周剑锋  
【摘要】:目的:观察骨形态发生蛋白-7及其受体(BMPR-Ⅱ,ALK-2,ALK-3,ALK-6)在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中的表达变化及其意义,同时在以前研究的基础上进一步探讨延肾胶囊延缓肾纤维化的作用及其机理。 方法:清洁级雄性成年大鼠80只随机分为四组:(1)正常对照组(N):大鼠不接受任何手术和治疗;(2)假手术组(S):大鼠手术剖腹后仅游离左侧输尿管但不结扎,同时术前一天开始每日给以安慰剂生理盐水灌胃治疗;(3)单侧输尿管梗阻组(U):大鼠行手术剖腹,分离并于肾盂下结扎左侧输尿管,同时术前一天开始每日给以安慰剂生理盐水灌胃处理;(4)延肾胶囊治疗组(T):大鼠行手术剖腹,分离并结扎左侧输尿管,同时术前一天开始每日予以延肾胶囊灌胃治疗。在术后1、3、7、14天,每组取5只大鼠处死,取左侧肾脏行各项指标检测,以免疫组织化学方法检测肾组织中BMP-7、TGF-β_1及α-SMA蛋白的表达水平,以逆转录-多聚酶链反应技术检测BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6的mRNA表达水平。 结果:正常对照组及假手术组,BMP-7蛋白高度表达,主要分布在肾小管及肾间质,在肾小管髓攀升支、远曲小管、集合管均有表达,近曲小管仅有少量表达,而肾小球内基本无表达;TGF-β_1偶见于肾小管上皮细胞胞浆内,主要在近曲小管表达,肾小球、肾间质及肾血管内均未见表达;α-SMA仅在血管平滑肌细胞表达,肾小球及肾小管肾间质中均未见表达;RT-PCR结果显示,BMP-7、BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6mRNA均有高度表达。在单侧输尿管梗阻组随着梗阻时间延长肾间质损害逐渐加重,BMP-7蛋白表达呈进行性下降趋势,而TGF-β_1、α-SMA随梗阻时间延长表达进行性增加;BMP-7蛋白表达于术后1天即明显下调,随梗阻时间延长减弱程度更明显,第14天表达量最弱,几乎没有明显的阳性表达;TGF-β_1于术后1天即在肾间质内有轻微表达,肾小管上皮细胞胞浆中表达较对照组增多,且随梗阻时间延长而进行性增加,术后14天表达最强,但各时相点肾小球均无明显TGF-β_1表达;α-SMA于术后第3天在肾间质中表达,术后第7天表达明显增加,肾小管上皮细胞亦有大量表达,术后14天α-SMA表达仍然维持在较高水平,但各时相点肾小球均无明显α-SMA


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