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光合细菌益生特性的实验研究

方立超  
【摘要】:背景: 人类整个胃肠道(gastrointestinal tract,GIT)栖居着大量微生物,这些微生物构成了GIT的生物屏障。但GIT随时经受各种内源性和外源性的氧化应激,导致胃肠黏膜的氧化损伤。人类已就微生物应对氧化应激开展了少量研究。据报道一些乳酸杆菌具有抗氧化特性,能减少摄入食物过程中活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的富集。一些乳酸菌还能降解超氧阴离子自由基和H_2O_2。据报道类球红细菌体内外有抗氧化作用,但作用部位不具体,作用机理不确切。尚未见其它种类光合细菌(photosynthetic bacteria,PSB)抗氧化作用的报道,也未见具有抗氧化作用的PSB对氧化损伤胃肠黏膜保护作用的研究报道。 当前PSB作为益生菌株已在国外的保健食品中应用,但尚未列入国内允许用于保健食品的菌种名单内,可见PSB作为益生菌株已有一定应用基础,但尚缺乏益生特性的系统资料。 目的: 本课题对8株PSB作为益生菌的安全性、功效性、工艺特性等益生特性进行初步研究,并对其进行系统鉴定,同时建立大鼠胃肠黏膜的急性水浸氧化应激模型来探讨PSB在宿主体内对氧化损伤胃肠黏膜的保护作用,为开发PSB保健品、药品提供益生特性资料和功效开发方向,以促进PSB在保健品、药品中的应用。 实验方法: (一)本课题通过表型特征、培养特征、生理生化特征和菌株的16S rDNA序列分析对8株PSB菌株进行了系统鉴定。(二)观察8株PSB菌株体外对8种抗生素药敏纸片的敏感性;对菌株2c(10~(10)CFU/mL)的安全性进行体内实验,包括急性毒性实验,检测血液中内毒素含量,用细菌培养方法观察摄入菌株2c后是否造成细菌易位,用扫描电镜和透射电镜观察菌株2c对肠黏膜和细胞结构有无不良影响,用试剂盒检测反映肝肾功能的血液生理生化指标了解菌株2c是否对肝肾功能有不良影响。(三)通过以下方法对PSB菌株的功效性进行了实验:(1)研究8株PSB菌株体外对酸和胆盐的耐受、在模拟胃液和小肠液中的存活率、体外对4种肠道常见致病菌的抑制作用和菌株体外对HT-29细胞的黏附作用,以及用Van Niel富集培养基富集培养大鼠摄入PSB期间以及停止摄入PSB后一周之内粪便中的PSB,以预测菌株在宿主体内存活和持续情况。(2)检测8


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