收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

hBD_2修饰真皮多能干细胞移植促进感染创面修复的实验研究

李楠  
【摘要】: 大面积的皮肤损伤、烧伤,特别是伴有放射损伤时,创面愈合相对困难。这既与创面修复细胞数量和功能显著下降有关,也与经常伴发的创面感染有关。在我们研究所前期的工作中,我们先后分离了大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cell, dMSCs)和小鼠骨髓间充质干细胞,采用静脉输注或创面局部移植的方法将上述两种细胞移植后,发现它们可显著加快创面愈合速度。但同时我们发现,创面感染仍是影响创面愈合速度的重要因素。 人β防御素2(human beta-defensin-2, hBD2)是内源性抗生素肽类大家族的一种,具有广谱高效的抗微生物活性。hBD2抗微生物的机制不同于传统的抗生素,其机制在于它分子表面带正电荷,能够与富含磷脂(带负电荷)的微生物表面结合,形成孔隙或通道,破坏膜的完整性,胞外的离子、多肽等流入胞内,而胞内重要的盐类、大分子等则泄漏到胞外,导致菌体不可逆性死亡,因而不易产生耐药性。上述优点使其在促进感染创面愈合中有着良好的应用前景。但正常情况下,其表达量极低。因此,本研究中,我们首先构建hBD2的腺病毒表达载体,然后将其转染至dMSCs使其高表达hBD2并移植到感染创面,同时发挥hBD2的抗菌效应以及dMSCs的修复作用,以更好地促进创面愈合。主要的方法和结果如下: 1. hBD2腺病毒表达载体的构建和鉴定。提取银屑病病人皮损组织总RNA,通过RT-PCR扩增含NotI和HindIII酶切位点hBD2全长cDNA,然后顺序克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV和骨架质粒pAd-Easy中。PacⅠ酶切阳性的重组质粒,通过脂质体法转染293细胞包装出hBD2的腺病毒载体,命名为Adv-hBD2。采用PCR、RT-PCR、细胞免疫荧光组织化学和Western-blot等方法证实,Adv-hBD2可转染dMSCs,并能成功表达hBD2。 2. Adv-hBD2转染真皮多能干细胞后表达产物活性鉴定。收集Adv-hBD2转染dMSCs 5d培养上清,并进行过滤、冷冻干燥浓缩及重溶,获得原液、5倍浓缩液和10倍浓缩液等3个不同hBD2浓度梯度的干预液。ELISA测定其浓度分别约为743.6、


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王涛;邱安春;李露斯;刘雁平;屈纪富;徐文岳;;含核受体真核表达载体的构建及其转染真皮多能干细胞(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年40期
2 胡亚伟;谢安;娄远蕾;涂伟;吴雷;赖贤良;阮琼芳;汪泱;邓志锋;;人真皮多能干细胞移植后在缺血性损伤脑组织中的迁移与分布[J];实验与检验医学;2010年02期
3 史春梦,麦跃,程天民,粟永萍,徐辉,郑怀恩,王军平,黄跃生,蒋建新;真皮来源成体多能干细胞体外自发恶性转化现象及机制研究[J];第三军医大学学报;2004年01期
4 胡亚伟;谢安;涂伟;娄远蕾;赖贤良;吴雷;阮琼芳;汪泱;邓志锋;;小鼠真皮多能干细胞在缺血性损伤脑组织移植后的分布与分化[J];中国微侵袭神经外科杂志;2010年06期
5 史春梦,程天民;创伤局部微环境对大鼠真皮多能干细胞生物学性状的影响[J];中华创伤杂志;2003年04期
6 李楠;肖桃元;粟永萍;徐辉;王军平;宗兆文;冉新泽;董世武;刘志君;;重组人Β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定[J];第三军医大学学报;2006年04期
7 屈纪富;江德鹏;郑怀恩;郝利;文亮;程天民;;创伤早期伤口液对体外培养真皮多能干细胞增殖迁移特性的影响[J];第三军医大学学报;2006年24期
8 高新宇;赵李平;柯昌能;王明刚;钟晓红;;糖尿病模型皮肤创面中人真皮多能干细胞向表皮细胞的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年14期
9 李楠;肖桃元;粟永萍;宗兆文;徐辉;王军平;冉新泽;刘志君;;人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达[J];创伤外科杂志;2006年01期
10 崔苏萍;李悦;谢安;汪泱;娄远蕾;黄学明;;大鼠真皮多能干细胞分离培养及其多分化潜能特性[J];中华实验外科杂志;2007年08期
11 宗兆文;程天民;粟永萍;李楠;董世武;艾国平;冉新泽;徐辉;;真皮多能干细胞移植后向全身照射大鼠骨髓优势分布的机制研究[J];第三军医大学学报;2006年10期
12 王涛;李露斯;刘雁平;屈纪富;徐海伟;;脊髓损伤后真皮多能干细胞移植时机的选择[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年33期
13 宗兆文;程天民;粟永萍;李楠;董世武;艾国平;冉新泽;徐辉;;增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体构建及其在移植干细胞示踪和定量中的初步应用[J];中国临床康复;2006年21期
14 刘志君;徐辉;粟永萍;冉新泽;许川山;;VEGF165基因转染真皮多能干细胞的实验研究[J];第三军医大学学报;2006年18期
15 屈纪富;史春梦;郑怀恩;郝利;程天民;;创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞差异表达cDNA文库的构建[J];感染.炎症.修复;2005年01期
16 宗兆文,程天民,冉新泽,粟永萍,史春梦;全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究[J];第三军医大学学报;2005年04期
17 史春梦,程天民;真皮多能干细胞促进大鼠急性放射损伤造血恢复的研究[J];中华放射医学与防护杂志;2003年06期
18 王少军;粟永萍;刘知人;史春梦;;RNA解旋酶p68在真皮多能干细胞增殖调控中的作用[J];第三军医大学学报;2010年08期
19 雷旭光;张永玉;董岩;杨宪鲁;;真皮多能干细胞移植对大鼠光老化皮肤组织的修复作用[J];中国美容医学;2014年09期
20 李楠;肖桃元;粟永萍;徐辉;王军平;宗兆文;董世武;冉新泽;刘志君;;hBD_2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究[J];第三军医大学学报;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 徐盈斌;柯昌能;祁少海;利天增;黄冰;谢举临;赵李平;刘坡;;不同年龄组人真皮多能干细胞的分离及体外分化特点[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
2 徐盈斌;柯昌能;祁少海;利天增;黄冰;谢举临;赵李平;刘坡;;不同年龄人真皮多能干细胞的分离及体外分化特点[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
3 屈纪富;江德鹏;郑怀恩;郝利;程天民;;真皮多能干细胞在创伤修复启动中作用的实验研究[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年
4 屈纪富;;创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞差异表达cDNA文库的构建[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 江德鹏;真皮多能干细胞参与创伤愈合机制的实验研究[D];第三军医大学;2006年
2 高新宇;人真皮多能干细胞促进糖尿病裸鼠创面愈合的实验研究[D];安徽医科大学;2011年
3 胡亚伟;人真皮多能干细胞移植对脑缺血损伤修复的探讨[D];南昌大学;2010年
4 李楠;hBD_2修饰真皮多能干细胞移植促进感染创面修复的实验研究[D];第三军医大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978