体外诱导毛囊Bulge细胞向皮脂腺细胞定向分化的研究

【摘要】： 毛囊是皮肤重要的附属器官,具有周期性生长的特点。目前已知毛囊干细胞位于外根鞘的隆突(bulge)区,研究证明毛囊bulge细胞具有多向分化的能力,不仅能分化形成毛囊,还能够形成皮脂腺和表皮角朊细胞。由于表皮、毛囊和皮脂腺关系密切,一般将三者统归为表皮-毛囊-皮脂腺单位(epidermo- piosebaceous unit)或表皮和毛囊皮脂腺单位(piosebaceous unit)。 皮脂腺(sebaceous gland)是皮肤重要的附属结构,具有抗炎、抵抗外来微生物的作用;它能够抗氧化,特别是抗紫外线的侵袭,对保持皮肤的完整和功能正常有着重要的作用。皮脂腺细胞的发育分化过程十分复杂,包括细胞形态的改变和基因表达的变化。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor, PPARγ)在成脂细胞分化过程中起着关键的作用,它能有效促进脂质合成。在PPARγ的三种亚型中,PPARγ2与脂肪和皮脂腺细胞的分化尤其相关。PPARγ2是脂肪细胞分化过程中重要的调节因子,它可促使成纤维细胞或骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化。尽管多项证据表明皮脂腺的更新和维持来源于毛囊的Bulge细胞,但是,至今仍未在体外实验中观察到bulge细胞分化为皮脂腺细胞的直接证据。毛囊干细胞体外分离培养技术的相对滞后,影响了研究的进一步深入。我们在体外分离培养了毛囊bulge细胞,并在一定的条件下诱导bulge细胞向皮脂腺细胞定向分化,同时构建PPARγ2质粒,通过脂质体将其转染到bulge细胞中,观察它对bulge细胞定向分化为皮脂腺过程中的作用。主要结果如下: 1、毛囊bulge细胞的分离培养及生物学特性的研究 采用免疫组化及原位杂交技术,检测大鼠毛囊Bulge区细胞干细胞表面标志物和分化标志物的表达情况,运用显微分离及酶消化法分离并培养大鼠毛囊Bulge细胞,观察培养的毛囊bulge细胞体外生长特性,同时比较了不同培养体系对bulge细胞生物学特性的影响。结果发现:(1)干细胞表面标志物K19的表达主要位于毛囊的Bulge区,而该区不表达毛囊上皮的细胞分化标志K10。(2)经酶消化后的毛囊Bulge区组织易贴壁,24h后即有细胞爬出,沿Bulge区向外扩展生长,3-4天后细胞出现融合,