收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛蒡子苷分离、纯化及其对实验性糖尿病大鼠血管内皮细胞保护机制的初步探讨

卢来春  
【摘要】: 目的:研究牛蒡子的化学成分,分离纯化牛蒡子苷,并初步探讨牛蒡子苷对实验性糖尿病大鼠血管内皮细胞损伤的保护机制。 方法:(1)采用硅胶柱层析、聚酰胺层析、LH-20等方法对牛蒡子的化学成分进行研究;(2)采用正交实验设计方法,以牛蒡子苷为指标,确定了牛蒡子乙醇回流提取的最佳工艺;对10种类型大孔吸附树脂进行筛选,筛选出对牛蒡子苷吸附效果最佳的树脂;采用硅胶柱层析法,对牛蒡子苷进一步分离纯化;(3)建立实验性糖尿病大鼠模型,以GLU、TC、TG、HDL-ch、LDL-ch、TB、ALB、BUN、CREA、GHbAlc、NO、SOD、ET、MDA和尿液中TB、ALB为指标,研究牛蒡子苷药理活性;(4)以差速消化法纯化Wistar大鼠的主动脉内皮细胞(RAECs)并进行传代培养,测定牛蒡子苷对高糖条件下RAECs活性、RAECs释放LDH、MDA和NO的变化以及RAECs表达内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。 结果:(1)对牛蒡子的化学成分进行研究,共分得12个单体化合物,并应用光谱法(1H-NMR、13C-NMR、DEPT),确定了全部12个化合物的结构,分别为牛蒡子苷元(arctigenin,1)、罗汉松脂素(matairesinol,2)、牛蒡酚B(lappaol B,3)、牛蒡酚A(lappaol A,4)、牛蒡酚F(lappaol F,5)、牛蒡子苷(arctiin,6)、8-羟基松脂素(8-hydroxypinoresinol,7)、(+)-秦皮树脂醇( (+)-Fraxiresinol,8)、无梗五加苷B(acanthoside B,9)、山萘酚(kaempferol,10)、槲皮素(quercetin,11)和异槲皮素(isoquercitrin,12);(2)采用正交实验设计方法,以牛蒡子苷为指标,确定了牛蒡子乙醇回流提取的最佳工艺为乙醇浓度70%,回流3次,回流时间1h,加8倍溶剂量。其次,以牛蒡子苷为指标,HPLC检测,通过对大孔吸附树脂进行静态和动态的吸附-洗脱实验,系统筛选了10种大孔吸附树脂,筛选出最佳树脂为AB-8型大孔吸附树脂;并对最佳树脂吸附-洗脱牛蒡子醇提液的工艺进行了实验研究,确定了分离富集工艺为:上样药液浓度控制为5.5mg/mL,上样流速控制为2BV/h,柱径高比控制为1:5,水洗3倍树脂体积,水洗速度1BV/h;再换以4BV50%乙醇洗脱,醇洗速度2BV/ h,收集50%醇洗液,浓缩干燥即得。经过AB-8型大孔吸附树脂处理后,牛蒡子苷固含量达到50%以上,最后,采用硅胶柱层析法,氯仿:甲醇(9:1)洗脱进行纯化,经HPLC检测,牛蒡子苷的含量达到90%以上;(3)牛蒡子苷各剂量组对实验性糖尿病大鼠血液中GLU、GHbAlc浓度影响不显著,牛蒡子苷醇提物组能降低GLU、GHbAlc浓度;牛蒡子苷各剂量组及其醇提物组均能降低实验性糖尿病大鼠血液中的TC、TG、LDL-ch、ALB、BUN、CREA、ET、MDA水平,降低糖尿病大鼠尿总蛋白、尿白蛋白排泄量;同时,升高糖尿病大鼠血液中的HDL-ch、NO、SOD水平;(4)牛蒡子苷在低剂量组时,对内皮细胞生长无影响,随着药物浓度升高,牛蒡子苷对内皮细胞有一定抑制作用,且有一定剂量依赖性;在一定浓度下(1μg·ml-1、10μg·ml-1及100μg·ml-1)下,牛蒡子苷呈剂量依赖性的显著减少高糖诱导的LDH、ET和MDA释放;显著增加高糖条件下内皮细胞分泌NO的能力;增加高糖条件下内皮细胞eNOS的表达。 结论:(1)牛蒡子的醇提物部分主要是木脂素类化学成分,其中牛蒡苷含量最高;(2)建立了牛蒡子苷的分离、纯化方法,此方法简便,稳定,可应用于生产;起草了牛蒡子苷的质量标准(草案)。(3)牛蒡子苷降血糖作用不明显,但可以通过调节实验性糖尿病大鼠的脂类、蛋白的代谢,对糖尿病血管并发症有一定疗效,通过促进一氧化氮合酶的表达而对内皮细胞起保护作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王萍;王洋;;生脉散在糖尿病治疗中的应用[J];天津中医药大学学报;2011年02期
2 王树国;;甲钴胺注射液防治糖尿病大鼠神经病变的实验研究[J];中国伤残医学;2011年05期
3 唐小平;陈庄;陈丽丽;陈枫;;糖尿病相关肝纤维化研究进展[J];重庆医学;2011年22期
4 靳瑾;李旭芳;孙侃;王敏哲;;辛伐他汀对糖尿病大鼠大血管病变的干预作用及机制研究[J];现代医药卫生;2011年17期
5 杨晓芸;郑庆虎;;中医药对糖尿病肾病的治疗研究进展[J];中国医药指南;2011年21期
6 谷莉娜;郑杨;谷铁军;王奭骥;;高压氧预处理对缺血-再灌注诱导的糖尿病大鼠心功能的影响[J];中国老年学杂志;2011年15期
7 金开山;田海荣;秦文浩;;还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠MDA和TAOC的影响[J];中国老年学杂志;2011年15期
8 赵伟成;杨承祥;王汉兵;李晓宏;;氯胺酮对糖尿病痛性周围神经病变大鼠机械痛阈的影响[J];广东医学;2011年14期
9 袁玉丰;余盈娟;林琳;;酶消化法分离培养糖尿病大鼠结肠平滑肌细胞[J];江苏医药;2011年11期
10 邢莎莎;陈超;;香椿子多酚对糖尿病大鼠的降血糖作用研究[J];中药药理与临床;2011年03期
11 姜楠;张冰冰;;玉液汤在糖尿病中应用探析[J];辽宁中医药大学学报;2011年08期
12 孙波;黄秀英;周悦;张晓英;周庆伟;;黄萸消渴胶囊对糖尿病鼠的降糖作用[J];中国老年学杂志;2011年16期
13 王明智;梅志刚;曾永保;杨林;谭红军;;石榴皮鞣质对糖尿病大鼠血管保护作用及其机制初探[J];医学研究杂志;2011年05期
14 司晓明;魏良洲;田字彬;孔心涓;;GLP-1对糖尿病大鼠胃排空调控机制的研究[J];青岛大学医学院学报;2011年05期
15 李莉;;生地黄治疗糖尿病的药理研究[J];长春中医药大学学报;2011年04期
16 袁有园;张端莲;;锌和维生素E对糖尿病大鼠抗凋亡基因Caspase-3表达的意义[J];数理医药学杂志;2011年04期
17 徐先祥;李道中;彭代银;张睿;;菟丝子多糖改善糖尿病大鼠糖脂代谢作用[J];中国实验方剂学杂志;2011年18期
18 朱梅佳;刘磊;贾茜;鹿伟;;血管内皮细胞生长因子在糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中的表达[J];中国糖尿病杂志;2007年08期
19 韦安阳;杨勇;何书华;罗新贵;张涛;刘洋;;miR-145在糖尿病性勃起功能障碍大鼠发病机制中的作用[J];南方医科大学学报;2011年06期
20 李潺;胡江;闻大翔;杭燕南;;丙泊酚对糖尿病大鼠海马组织蛋白质表达影响的蛋白组学研究[J];上海交通大学学报(医学版);2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 牛轶雯;谢挺;曹小赞;缪明远;董叫云;葛奎;戎柳;花兰女;陆树良;;糖尿病大鼠创面愈合中FGF2相关事件发生的研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
2 吴亮;;棉酚对2型糖尿病大鼠大脑皮层、海马神经元凋亡与认知功能的影响[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
3 沈丽;殷峻;;抗性淀粉改善糖尿病大鼠子代空腹血糖[A];第13届全国临床营养学术会议资料汇编[C];2011年
4 贺学林;陈以平;;糖尿病大鼠早期肾脏CoLⅣ及MMP-2/TIMP-2改变的实验研究[A];第七届全国中西医结合肾脏病会议论文汇编[C];2003年
5 陆颖理;吴晖;庞玉萍;朱惠;;PPAR-γ配体对糖尿病大鼠心肌超微结构、心房利钠肽mRNA表达影响的研究[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年
6 张振华;陶枫;刘瑾;姚政;陆灏;沈远东;;健脾清化方对糖尿病大鼠β细胞分泌功能及PDX-1基因表达的影响[A];第十二届全国中医糖尿病大会论文汇编[C];2010年
7 金花;徐晓云;徐海元;罗峥;王悦;;糖尿病大鼠海马超微结构及蛋白质组学研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
8 赵明;张召峰;梁江;李勇;;海洋胶原肽对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肝肾功能的保护作用[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年
9 易如海;杨立勇;;糖尿病大鼠视网膜中核因子-κB与血小板源性生长因子-B表达的意义探讨[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年
10 柳刚;关广聚;亓同钢;傅余芹;李学刚;孙云;吴涛;文蓉珠;;丹参对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制[A];第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 卢来春;牛蒡子苷分离、纯化及其对实验性糖尿病大鼠血管内皮细胞保护机制的初步探讨[D];第三军医大学;2007年
2 卢薇娜;辛伐他汀和血脂康对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响及其可能机制[D];浙江大学;2010年
3 李华青;Exendin-4在骨髓间充质干细胞治疗糖尿病中作用的实验研究[D];山西医科大学;2010年
4 张丽萍;糖尿病大鼠骨代谢特点的研究观察[D];山东大学;2008年
5 姜秀云;健脾固胰饮对2型糖尿病大鼠炎症因子和肝组织TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响[D];山东中医药大学;2010年
6 黄鸣清;丹酚酸B改善2型糖尿病大鼠IR作用及其机制研究[D];广州中医药大学;2010年
7 王继红;枸杞多糖对糖尿病大鼠血—视网膜屏障的保护作用及ROCK通路表达的机理研究[D];辽宁中医药大学;2010年
8 王会平;白细胞介素-2对糖尿病性心血管功能改变的影响及其相关机制研究[D];浙江大学;2008年
9 唐代屹;仙贞片对糖尿病大鼠肾保护作用的实验研究[D];中国协和医科大学;2001年
10 马利;乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究[D];华中科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵勇;MafA基因治疗影响糖尿病大鼠血糖及胰岛素调节的研究[D];扬州大学;2010年
2 李琴;大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中神经肽Y及其Y1、Y2受体表达的影响[D];复旦大学;2010年
3 李兆妍;运动单位计数技术在糖尿病中应用的研究[D];天津医科大学;2010年
4 亢建国;运动结合灵芝多糖对糖尿病大鼠血糖及脂代谢的影响[D];西北师范大学;2010年
5 王宝岗;局部胰岛素干预影响2型糖尿病大鼠种植体骨结合的研究[D];第四军医大学;2010年
6 付建茹;糖尿病大鼠不同时期主动脉护骨素的表达及相关因素分析[D];天津医科大学;2010年
7 纪利利;糖尿病中头颈部血管CTA特征研究[D];山西医科大学;2011年
8 王海英;急性游泳运动对糖尿病大鼠脂肪组织—胰岛轴的影响及其中枢机理初探[D];河北师范大学;2004年
9 沈炜;转化生长因子-β在正常和糖尿病大鼠视网膜中的基因表达研究[D];第二军医大学;2004年
10 周军;糖尿病肝损伤防治的初步研究[D];江苏大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 程书权;研究已有进展 结果尚待完善[N];医药经济报;2001年
2 孙丽;孙睦;中医药治疗DM微血管病变研究[N];中国医药报;2004年
3 陶春祥;何占德;陶钧;中药黄酮类抗DM的作用研究[N];中国医药报;2004年
4 王海颖 陈以平;牛蒡子治疗糖尿病肾病机制揭晓[N];中国医药报;2005年
5 北京协和医院中医科主任 梁晓春;糖尿病周围神经病变的中西医治疗进展[N];中国医药报;2009年
6 刘海文;葛根素治疗糖尿病血管并发症[N];中国医药报;2005年
7 本报记者 赵万标;继承名医经验 提高辨治水平[N];中国中医药报;2008年
8 本报记者 王乐羊;中西医结合防治糖尿病大有可为[N];中国中医药报;2002年
9 蒲昭和;中药胡芦巴 降糖又降脂[N];健康报;2001年
10 马淑惠;针灸治疗糖尿病周围神经病变研究[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978