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大鼠视觉可塑性相关基因cDNA消减文库的构建及筛选

江文珊  
【摘要】: 目的:采用抑制性消减杂交技术构建大鼠视觉可塑性相关基因的cDNA消减文库,筛选与视觉可塑性关键期终止相关的基因及与视觉可塑性相关的基因,探讨视觉可塑性及其关键期终止的分子机制。 方法:本研究主要分为四个部分,各部分的具体研究方法如下:1、自行设计并制作专用大鼠暗饲养箱,建立暗饲养动物模型及暗饲养后予光照刺激动物模型。2、采用暗饲养动物模型(D67)及暗饲养后予光照刺激动物模型(D60+L7),应用抑制性消减杂交技术构建大鼠视皮质与视觉可塑性关键期终止相关基因的cDNA消减文库。并通过PCR筛选、反向Northern杂交、测序及同源性检索对差异表达基因进行分析,筛选视觉可塑性关键期终止相关基因。3、应用抑制性消减杂交技术构建幼年(P28)和成年(P60)大鼠视皮质差异表达基因的cDNA消减文库。并通过PCR筛选、反向Northern杂交、测序及同源性检索对差异表达基因进行分析,筛选视觉可塑性相关基因。4、采用半定量RT-PCR技术检测部分筛选到的基因在不同组大鼠视皮质中表达情况,进一步验证应用抑制性消减杂交技术筛选到的差异表达基因的真实性。 结果:1、自行设计并成功制作了能满足实验要求的专用大鼠暗饲养箱,成功建立了暗饲养动物模型及暗饲养后予光照刺激动物模型。2、成功构建了大鼠视皮质与视觉可塑性关键期终止相关基因的cDNA消减文库,经筛选,得到14个在D60+L7大鼠视皮质中上调表达基因的片段。其中13个为已知基因,一个为新基因片断。发现锌指蛋白9、烯醇酶-1、热休克蛋白8、脂肪细胞补体相关蛋白、肽基脯氨酸异构酶A、非神经元烯醇酶及ftp-3基因参与了视觉可塑性关键期的终止,同时,也筛选到既往有文献报道其功能与可塑性相关的β-微管蛋白基因、髓磷脂碱蛋白基因、亲环素基因参与了视觉可塑性关键期的终止。3、成功构建了幼年和成年大鼠视皮质差异表达基因的cDNA消减文库,经过筛选,最后确定了11个基因在视觉可塑性关键期内的大鼠(P28)视皮质中上调表达,4个基因在视觉可塑性关键期终止后的大鼠(P60)视皮质中上调表达。发现硬脂酰基-辅酶A去饱和酶2基因、α血红蛋白基因、谷氨酸-脯氨酸二肽重复蛋白基因、mDj4、不均一核糖核酸核蛋白C1/C2基因、strain BN/SsNHsdMCW


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