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纳米细菌与Ⅲ型前列腺炎以及前列腺结石发病关系的实验研究

沈学成  
【摘要】: 背景及目的: Ⅲ型前列腺炎(CPPS)是临床上最常见的慢性前列腺炎,迄今病因不清,治疗极其困难。一直以来,人们主要对其感染外的病因进行了探索并提出了多种假说,但均不能完全解释该病的临床特点。钙化灶的存在以及抗生素治疗常常疗效明显,启示我们可能有不被常规检查方法发现的感染物存在。 CPPS患者前列腺中经常出现结石,这种前列腺结石是在前列腺腺泡和腺管内形成的真性结石,它形成的原因现在还不很明了,可能与前列腺腺泡和排泄管慢性炎症、促或抑成核因子的作用、钙离子浓度等因素有关。在前列腺结石的形成中是否有不为我们认知的感染性病因存在同样值得我们探索。 而纳米细菌(nanobacteria)的发现和该细菌本身独特的致病特点为阐明CPPS和前列腺结石的病因提供了一条崭新的思路。 纳米细菌是新发现的纳米级(50~200nm)球菌,在普通的微生物培养条件下不能生长。它能感染人体内多种细胞,导致被感染细胞发生骨骼外钙化(病理性钙化),同时释放毒素引起组织炎症。该发现为Ⅲ型前列腺炎和前列腺结石发生机制研究提供了全新的切入点,现未见有相关文献报道,值得研究。通过研究,有望证实纳米细菌在CPPS和前列腺结石中的病因作用,并为从清除纳米细菌入手来治疗CPPS和前列腺结石提供理论依据。 方法: 本研究拟从大样本Ⅲ型前列腺炎分泌液和前列腺结石中分离培养纳米细菌,并采用间接免疫荧光、钙染色、电镜观察、16s rRNA基因扩增及测序等方法对可疑培养物进行鉴定,研究纳米细菌在CPPS和前列腺结石中的病因作用,为临床治疗提供新的病原学依据。 结果: 1、标本培养3-4周后观察发现部分培养管底部出现紧贴管壁生长的白色沉淀。 2、单克隆抗体间接免疫荧光染色对纳米细菌进行鉴定,结果发现CPPS患者组中29例前列腺液标本中存在着纳米细菌,阳性率为58 %;而正常对照组中的前列腺液标本仅有2例存在纳米细菌,阳性率为4 %。二者差异有统计学意义(χ2 =34.08 P 0.01)。 3、单克隆抗体间接免疫荧光染色对纳米细菌进行鉴定,结果发现26例结石标本中有纳米细菌存在,阳性率为65.0 %。其中Ⅰ+Ⅳ组中6例有有纳米细菌存在,阳性率为37.5 %;Ⅱ+Ⅲ组中20例有纳米细菌存在,阳性率为83.3%。两者间差异有统计学意义(χ2 =8.86 P 0.01)。 4、透射电镜下观察,纳米细菌呈球状或球棒状,大小约100~500nm,绝大多数聚集成簇,菌体周围有一层黑色的物质包绕,并有羟基磷灰石分布;扫描电镜下观察,纳米细菌成簇生长,形态呈不规则球形,直径200-800nm。 5、茜素红染色观察结果:细菌绝大多数聚集成簇,个体极其微小。 6、特异性片段的测序结果经软件与纳米细菌16sRNA序列进行比较后发现相似度为98%:Score = 2480 bits (1290), Expect = 0.0,Identities = 1387/1409 (98%), Gaps = 4/1409 (0%),Strand=Plus/Plus。 结论及展望: 1、采用单克隆抗体间接免疫荧光染色对纳米细菌进行鉴定,结果发现CPPS患者组中纳米细菌阳性率为58 %;而正常对照组中的纳米细菌阳性率为4 %。二者差异有统计学意义(χ2 =34.08 P 0.01)。表明Ⅲ型前列腺炎的发病与纳米细菌的感染存在着密切的关系。 2、采用单克隆抗体间接免疫荧光染色对纳米细菌进行鉴定,结果发现有26例前列腺结石标本中存在着纳米细菌,阳性率为65 %。表明前列腺结石的发病与纳米细菌的感染也存在着密切的关系。 3、在CPPS患者的前列腺液和前列腺结石中提取出纳米细菌的核酸成分,并与基因库中纳米细菌16SrRNA基因序列进行比对,鉴定出纳米细菌16SrRNA基因,为纳米细菌在CPPS和前列腺结石发病中起重要作用提供进一步的佐证。 4、纳米细菌的培养周期很长,用形态学来进行鉴定耗时长,而通过PCR法、T载体克隆和测序等手段鉴定纳米细菌的16SrRNA基因就比较简便,这就为纳米细菌的鉴定提供了一条快速的检测途径,同时为研究纳米细菌的矿化基因提供了一个研究基础。 5、纳米细菌可能是CPPS和前列腺结石发病中起中重要作用的一种微生物,其意义可能相当于HP与胃溃疡的关系。在临床治疗中我们可以根据纳米细菌的微生物特性,从清除纳米细菌入手来治疗CPPS和前列腺结石,这就为CPPS和前列腺结石的根治提供了一条崭新的道路。


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