收藏本站
收藏 | 论文排版

青蒿琥酯抗炎与抗菌增敏作用在其保护细菌脓毒症模型小鼠中的作用及机制研究

李斌  
【摘要】: 目的: 脓毒症(Sepsis)是由感染因素引起的全身失控性炎症反应综合症(Systemic inflammatory response sydrome, SIRS),由其导致的脓毒症休克和多器官功能障碍综合症(multiple organ dysfuction syndrome, MODS)是死亡的重要原因,病死率高达50%-80%,至今尚无有效的治疗手段。 目前认为,菌体成分如细菌基因组DNA和存在于革兰阴性细菌外膜的脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)等是诱导脓毒症发生的主要致病因子。虽然抗菌药物可抑制细菌的增殖,达到治疗感染性疾病的目的,但已有大量实验表明,许多抗菌药物尤其是β-内酰胺类抗生素在杀死细菌的同时,能促使内毒素从细菌胞膜的释放而加重感染。因此,寻找具有治疗细菌脓毒症的药物对提高感染性疾病的治疗效果具有重要意义。 我们实验室前期的工作已证实:青蒿素对LPS、CpG ODN、热灭活大肠埃希菌攻击小鼠具有显著的保护作用;其与β-内酰胺类抗生素同时使用可对活大肠埃希菌攻击小鼠具有显著保护作用。但是,由于青蒿素不溶于水或油,仅能口服给药,不适宜于重症脓毒症病人的抢救。 青蒿素的4种衍生物包括双氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚及青蒿琥酯,均可静脉、肌肉给药,剂型适合重症患者使用。鉴于与青蒿素相似的化学结构,推测它们可能具有治疗脓毒症的效果。为此,本课题拟通过体外细胞因子实验筛选出对不同致炎成分诱导的细胞因子释放有较强抑制作用的青蒿素衍生物;在上述工作基础上,采用不同脓毒症模型研究该青蒿素衍生物防治细菌脓毒症的作用并探讨其可能的作用机制,为寻找有效的治疗细菌脓毒症的药物并拓宽青蒿素及其衍生物的临床适应症提供实验依据。 方法: 一、双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚抑制炎性细胞因子释放的活性筛选:ELISA法观察三种衍生物对不同刺激物诱导的小鼠原代腹腔巨噬细胞和传代巨噬细胞系RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-6的影响 二、青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用:分别建立热灭活大肠埃希菌攻击脓毒症小鼠模型、活大肠埃希菌攻击脓毒症小鼠模型和CLP脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对不同脓毒症模型小鼠的保护作用。 三、青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠保护作用的分子机制研究 (一)青蒿琥酯的抗炎作用分子机制研究 1.生物传感器技术研究青蒿琥酯与LPS/lipid A或CpG ODN的直接结合作用; 2.鲎试剂动态浊度法检测青蒿琥酯对内毒素的体外中和作用; 3.流式细胞术观察青蒿琥酯对CpG ODN在RAW264.7细胞表面结合及细胞内聚集的影响; 4. RT-PCR观察青蒿琥酯对TLR4 mRNA、TLR9 mRNA表达的影响;免疫荧光技术检测青蒿琥酯对TLR9蛋白表达的影响; 5. ELISA法检测青蒿琥酯对NF-κB活化的影响; (二)青蒿琥酯抗菌增敏作用及其机制研究 1.采用微孔稀释法观察青蒿琥酯和不同抗菌药物的MIC、青蒿琥酯和不同抗菌药物联合使用时对大肠埃希菌国际标准株ATCC35218和临床分离株MICs的影响; 2.采用动态生长曲线法观察青蒿琥酯和不同抗菌药物联合使用时对大肠埃希菌ATCC35218和大肠埃希菌临床分离株的体外协同抗菌作用; 3.采用激光共聚焦、荧光分光光度法观察青蒿琥酯对柔红霉素在大肠埃希菌ATCC35218内聚集的影响; 4.透射电镜技术观察青蒿琥酯对大肠埃希菌ATCC35218胞膜通透性的影响。 结果: 一、双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚抑制炎性细胞因子释放的活性筛选三种青蒿素衍生物中,青蒿琥酯抑制炎性细胞因子释放的作用最强; 二、青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用 1.青蒿琥酯能明显延迟热灭活大肠埃希菌攻击模型小鼠的死亡时间,降低脓毒症小鼠的死亡率,其保护作用可能与其降低热灭活大肠埃希菌攻击小鼠血清内毒素和TNF-α的水平有关; 2.青蒿琥酯与庆大霉素、舒氨西林联合使用对活大肠埃希菌攻击脓毒症模型小鼠具有协同保护作用; 3.青蒿琥酯与舒氨西林联合使用对CLP脓毒症模型小鼠具有协同保护作用。 三、青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠保护作用的分子机制研究 (一)青蒿琥酯的抗炎作用的机制研究 1.青蒿琥酯在体外不能直接结合LPS和CpG ODN,对LPS无中和作用; 2.青蒿琥酯对CpG ODN表面的结合,但增加CpG ODN在细胞内的聚集; 3.青蒿琥酯可抑制热灭活大肠埃希菌、LPS和CpG ODN诱导的RAW264.7细胞TLR4 mRNA和TLR9 mRNA高表达和TLR9蛋白的表达; 4.青蒿琥酯可抑制热灭活大肠埃希菌诱导的RAW264.7细胞NF-κB的活化。 (二)青蒿琥酯的抗菌增敏作用及机制研究 1.青蒿琥酯单独使用几乎没有抗菌作用,但与不同抗生素联合使用时对大肠埃希菌可产生明显的抗菌增敏作用; 2.青蒿琥酯可增加柔红霉素在细菌内聚集,呈显著的量效和时效关系; 3.一定浓度的青蒿琥酯预处理可破坏大肠埃希菌细胞膜结构的完整性,其抗菌增敏作用机制可能与青蒿琥酯增加抗菌药物在细菌内的聚集有关。 结论: 1.双氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚3种青蒿素衍生物中,青蒿琥酯抑制炎性细胞因子释放的作用最强; 2.青蒿琥酯对热灭活大肠埃希菌攻击脓毒症模型小鼠具有显著的保护作用,青蒿琥酯与抗菌药物联合使用对活大肠埃希菌攻击脓毒症和CLP脓毒症模型小鼠均具有协同保护作用; 3.青蒿琥酯的抗炎作用机制可能与抑制TLR4、TLR9表达和抑制NF-κB活性,从而减少致炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放有关; 4.青蒿琥酯的抗菌增敏作用机制可能与增加抗菌药物在细菌内的聚集有关; 5.鉴于青蒿琥酯的抗炎作用与抗菌增敏作用、对细菌脓毒症模型动物具有明显的保护作用,深入研究青蒿琥酯具有重要意义。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 金慧玲,张汝芝,高玉祥,唐素兰;青蒿琥酯抗真菌、抗细菌的实验研究[J];中国微生态学杂志;2003年01期
2 蒋江红;青蒿琥酯的药理研究纂要[J];中医药学刊;2003年09期
3 吴国东,周慧君;青蒿琥酯诱导人脐静脉内皮细胞凋亡[J];中国药理学与毒理学杂志;2004年04期
4 王国江,顾军,张海清;青蒿琥酯对中性粒细胞趋化的影响[J];中国皮肤性病学杂志;2004年07期
5 张燕萍,黄轶昕,梁幼生,许永良,杨坤,洪青标,姜玉骥,奚伟萍,朱荫昌;青蒿琥酯与吡喹酮联用对日本血吸虫不同感染度家兔的治疗效果[J];中国寄生虫病防治杂志;2005年03期
6 刘旭;;青蒿琥酯的研究进展[J];中国新药杂志;2006年22期
7 陈雪松;李宗吉;张美娟;季旻珺;胡姝颖;吴海玮;吴观陵;;青蒿琥酯治疗小鼠日本血吸虫病的血清学研究[J];中国病原生物学杂志;2007年04期
8 盛庆寿;李国桥;;青蒿琥酯抗肿瘤实验研究进展[J];广州中医药大学学报;2007年05期
9 武晓玉;张玉萌;;青蒿琥酯抗人宫颈癌Hela细胞的实验研究[J];中国药业;2007年21期
10 武晓玉;张玉萌;;青蒿琥酯抗肿瘤作用的实验研究[J];中国药物应用与监测;2008年06期
11 陈立军;姚丽;靳秋月;谢红;呼文亮;;基因芯片技术分析青蒿琥酯抑癌作用机制[J];中草药;2008年09期
12 苗立云;张祖贻;;铁离子增强青蒿琥酯抗癌作用及改变癌细胞死亡方式研究[J];中草药;2008年10期
13 胡鑫鹦;;液相法检测青蒿琥酯含量[J];黑龙江医药;2009年02期
14 张燕丽;;青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展[J];中医药信息;2009年06期
15 焦淑清;王发善;朱光怡;于莲;白雪彬;;青蒿琥酯透皮贴剂的制备及体外评价[J];时珍国医国药;2012年09期
16 黄莺莺;陈日南;;青蒿琥酯的荧光法测定[J];医药工业;1987年08期
17 姚朗;滕翕和;熊春生;;青蒿琥酯抑制红系造血的机理研究[J];四川生理科学杂志;1991年03期
18 石笑春,滕翕和,SadlerT.W;青蒿琥酯对体外培养小鼠胚胎的影响[J];癌变.畸变.突变;1993年06期
19 郭尧,吴玲娟,徐潘生,杨明瑾,范济堂,李思温;大白鼠长期服用青蒿琥酯的安全性评估[J];中国血吸虫病防治杂志;2000年01期
20 王勤,吴理茂,李爱媛,赵一,王乃平;青蒿琥酯抗肝癌作用的实验研究[J];中国中药杂志;2001年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李斌;周红;;青蒿琥酯联合不同抗生素对四种细菌的抗菌增敏作用及机制研究[A];药学发展前沿论坛及药理学博士论坛论文集[C];2008年
2 李斌;周红;;青蒿琥酯联合不同抗生素对四种细菌的抗菌增敏作用及机制研究[A];中国药理学会化疗药理专业委员会第九届学术研讨会论文摘要集[C];2008年
3 梁爱华;薛宝云;王金华;李春英;;青蒿琥酯对内毒素诱导的炎症反应的抑制作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
4 陈均法;郑智茵;沈建平;刘俊玲;;青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡的实验研究[A];浙江省中西医结合学会血液病专业委员会第二次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2007年
5 沈雪松;汪涛;金美华;赵春霞;秦雪莲;刘汉甫;;青蒿琥酯脂质体对大肠杆菌热活性影响[A];中国化学会成立80周年第十六届全国化学热力学和热分析学术会议论文集[C];2012年
6 周红;李斌;王宁;郑江;张蓉;李军;王俊;丁国富;张乐之;;青蒿琥酯抗炎与抗菌增敏作用在其保护细菌脓毒症模型小鼠中的作用及机制研究[A];中国病理生理学会危重病医学专业委员会第八届全国大会暨中华呼吸病学会呼吸生理和重症监护学组年会论文集[C];2008年
7 许娜;刘晓力;杜庆锋;张晋芳;肖小珍;许露露;骆许静;黄斌涛;;青蒿琥酯对白血病细胞β-catenin信号通路相关基因影响的研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
8 周磊;葛小刚;林赛峰;郑志强;;青蒿琥酯对腹部肿瘤作用研究进展[A];2012年浙江省外科学学术年会论文集[C];2012年
9 梁爱华;薛宝云;李春英;王金华;王岚;;青蒿琥酯对内毒素诱导的一氧化氮合成的抑制作用[A];2002中药研究论文集[C];2002年
10 杜幼芹;肖长义;;青蒿琥酯抗宫颈癌作用及机理的实验研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 李斌;青蒿琥酯抗炎与抗菌增敏作用在其保护细菌脓毒症模型小鼠中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2008年
2 黄利华;青蒿琥酯对人急性白血病原代细胞增殖抑制作用及其机制的研究[D];广州中医药大学;2011年
3 刘金元;青蒿琥酯抗实验性肝纤维化机理的探索性研究[D];广州中医药大学;2008年
4 姚琦;青蒿琥酯增加大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素敏感性及相关机制探讨[D];第三军医大学;2011年
5 李世辉;青蒿琥酯抗骨髓瘤作用及机制研究[D];河北医科大学;2008年
6 王颖;青蒿琥酯抗骨髓增生异常综合征作用和机制的体外实验研究[D];河北医科大学;2012年
7 蒋为薇;青蒿琥酯增强β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)脓毒症模型小鼠的保护作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年
8 盛庆寿;青蒿琥酯对H_(22)肝癌小鼠的抑瘤作用及对肿瘤组织VEGF、FasL的影响[D];广州中医药大学;2008年
9 陈浩;Ang-1在多发性骨髓瘤中的表达和青蒿琥酯、β-榄香烯抗骨髓瘤效应[D];河北医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杜海林;青蒿琥酯抗日本血吸虫作用的研究[D];苏州大学;2009年
2 茹炜炜;青蒿琥酯对日本血吸虫作用的实验研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2006年
3 廖华;青蒿琥酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响[D];华中科技大学;2006年
4 吕阳;青蒿琥酯拮抗中暑内毒素血症作用及其机制探讨[D];南方医科大学;2007年
5 余梦辰;青蒿琥酯增强小鼠腹腔巨噬细胞内化清除内毒素、大肠埃希菌的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2012年
6 黎洪秀;青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖影响的分子生物学机制研究[D];桂林医学院;2012年
7 李薇;青蒿琥酯对白纹伊蚊四龄幼虫的毒性研究[D];暨南大学;2008年
8 代震宇;青蒿琥酯抑制兔角膜新生血管形成的实验研究[D];重庆医科大学;2007年
9 陈永顺;青蒿琥酯体外抗肿瘤效应及其分子机制研究[D];广西医科大学;2008年
10 张孝飞;青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响[D];桂林医学院;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通讯员 王复轩 本报记者 杨联民;自主创新大有可为[N];中华工商时报;2006年
2 记者 田远进;全力支持做强做大青蒿琥酯产业[N];桂林日报;2006年
3 黎郎;青蒿琥酯被准予治疗危重疟疾[N];医药经济报;2007年
4 华;青蒿琥酯治疗危重疟疾[N];健康报;2007年
5 海闻;美批准青蒿琥酯用于治疗危重疟疾[N];中国医药报;2007年
6 本报实习生 彭旭才 黄理松 本报记者 莫艳萍采写、整理;广西青蒿琥酯高技术产业化项目列入国家高技术产业化计划[N];广西日报;2005年
7 ;复兴医药:题材丰富 潜力巨大[N];民营经济报;2005年
8 邓德仁;青蒿琥酯联合用药受到国际关注[N];中国医药报;2004年
9 刘玉;国产青蒿琥酯类药物获世界卫生组织认可[N];医药经济报;2006年
10 金通证券 钱向劲;G复星:药业分销龙头[N];证券时报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978