收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Claudin-3作为候选癌标在前列腺癌诊治中的应用研究

毕罡  
【摘要】: 前列腺癌为中老年男性常见的恶性肿瘤和主要死亡原因之一。在美国男性的癌症相关致死原因中前列腺癌占据了第二的位置。在恶性肿瘤中,前列腺癌的自然病史较为独特,它发病隐匿,早期缺乏特征性表现,易发生早期转移,出现症状后,往往已是晚期。另一方面,目前前列腺癌多采用手术治疗,创伤较大,虽然可以应用内分泌疗法进行治疗,但治疗是姑息性的,肿瘤最终将失去对内分泌治疗的敏感性而继续发展,导致患者死亡;而且前列腺肿瘤对化疗敏感性差,治疗较为棘手。上皮来源的肿瘤占了全部恶性肿瘤的90%,他们对化疗药物的不敏感成为临床上遇到的主要问题之一。在前列腺癌诊断和治疗领域,寻找和鉴定前列腺癌差异表达基因,将其作为前列腺癌诊断及治疗靶点目前已经成为国际上研究前列腺癌的热点之一。 研究表明在肿瘤发生过程中,细胞间的紧密连接、连接粘附分子和基底蛋白等膜蛋白存在异常表达。这些研究提示异常表达的膜蛋白对于作用于肿瘤细胞的药物来说可能具有重要意义。 Claudin蛋白是存在于紧密连接中的分子量约为23KDa的跨膜蛋白,它在紧密连接的屏障功能当中起了非常重要的作用。包括Claudin-3和Claudin-4在内,Claudin蛋白家族有超过20个成员,并且它们表现出明显的组织特异性。有趣的是,在卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、前列腺癌等上皮来源的恶性肿瘤中,常常观察到Claudin蛋白有上调表达。而且研究发现Claudin-3有可能作为前列腺癌的上调表达基因,成为前列腺癌新的候选癌标进行临床诊治的研究。 随着化学、药理学、蛋白质组学、基因组学等研究领域的快速发展,目前发现并研制了很多新的抗肿瘤药物,但就临床应用来说,有必要找到一种使这些新药更有选择性发挥其作用的药物传输系统。产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)可能成为这一系统,它是一个分子量为35KDa的多肽,能导致食物中毒并与大多数的人食源性传染病相关。该肠毒素有两个功能不同的区域组成:一个是N-末端大约为22KDa的区域,主要起细胞毒作用;另一个是C-末端大约为13KDa的区域,这一结构域介导了CPE和目标细胞膜的结合并使之部分的进入胞质内部,引发细胞对大量小分子通透性的改变,从而引起细胞的空泡变和溶解。在Claudin蛋白家族中只有Claudin-3和4是CPE的受体,可以结合CPE并引起胞溶作用。这些发现表明CPE可以用来特异性结合上皮来源癌细胞中的Claudin跨膜蛋白。目前CPE已经被成功的用于治疗高表达Claudin-3和4的卵巢癌和胰腺癌中。本研究拟通过实验探讨Claudin-3作为CPE的靶标在前列腺癌诊治中可否成为一个候选癌标。 方法:采用免疫组化及Western blot方法检测Claudin-3在前列腺增生及前列腺肿瘤组织的表达状态,同时分析Claudin-3与前列腺癌病理分期的关系,评价Claudin-3作为前列腺癌诊断候选癌标的价值。培养并鉴定表达肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615,接着提取细菌的基因组DNA,PCR扩增克隆出全长cpe基因并连接入pET-28a载体质粒中,构建含全长cpe基因的重组表达质粒pET-28a-cpe,经酶切及测序鉴定正确后,转化入感受态E.coli BL21中表达,并优化表达条件,进行最适诱导剂浓度和最适诱导时间的筛选;再通过Ni-NTA柱进行亲和层析纯化。纯化后的CPE作用于体外培养的人前列腺癌细胞株22RV1以及前列腺癌荷瘤裸小鼠模型,在CPE安全剂量下观察CPE激发的对前列腺癌癌细胞的抑制作用,进一步探讨Claudin-3作为前列腺癌治疗候选靶点的可行性及安全性,为CPE今后的临床应用打下基础。 结果: 1、前列腺组织石蜡切片免疫组化半定量分析显示Claudin-3在前列腺组织腺体周围细胞的胞膜中均有不同程度的表达;前列腺癌组中的表达显著高于良性前列腺增生组,但在前列腺癌的高、中、低分化组中表达无统计学差异。用Western blot方法对前列腺组织中Claudin-3蛋白的含量分析显示:前列腺癌组中的Claudin-3蛋白表达显著高于前列腺增生组。 2、复苏、培养产肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615,并进行菌株的鉴定。提取细菌的基因组DNA,PCR扩增出全长cpe基因,并与质粒载体pET-28a连接,构建了重组的pET-28a-cpe质粒,酶切鉴定及测序结果表明,成功构建了原核表达质粒pET-28a-cpe。 3、将质粒pET-28a-cpe转化入E.coli BL21感受态中诱导表达,并优化诱导表达的条件,最后通过Ni-NTA亲和层析进行分离纯化,纯化后的重组CPE蛋白浓度达到90%以上。 4、进行人前列腺癌细胞株22RV1和PC-3的体外培养,并应用Claudin-3单抗进行免疫荧光染色,证实体外培养的人前列腺癌细胞株22RV1可以特异性高表达Claudin-3。将CPE作用于培养的22RV1,显示CPE对肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用,细胞增殖明显降低。 5、建立种植22RV1的前列腺癌荷瘤裸鼠模型。将CPE进行瘤内注射,发现肿瘤细胞坏死、肿瘤体积明显缩小,肿瘤生长明显延缓。 结论:Claudin-3在前列腺癌组织中有特异性高表达,但与肿瘤的恶性程度相关性不明显;运用基因工程方法,成功构建了原核表达质粒pET-28a-cpe并转化E.coli BL21,诱导其表达CPE后,通过Ni-NTA亲和层析进行分离纯化,获得了较高纯度的CPE;CPE对特异性高表达Claudin-3的体外培养前列腺癌细胞株及前列腺癌荷瘤裸鼠模型均能产生明显生物学效应,发生细胞毒性作用,使肿瘤细胞坏死、肿瘤生长延缓。上述结果提示Claudin-3可能成为前列腺癌诊断和治疗的新癌标;本研究为CPE应用于肿瘤的临床研究及治疗提供了可能的前景。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;男性生殖器疾病[J];国外科技资料目录(医药卫生);2002年07期
2 胡明;高危良性前列腺增生经尿道气化加电切手术时机的探讨[J];现代泌尿外科杂志;2005年02期
3 潘沛;吕加国;;α_(1A)-受体拮抗剂研究新进展[J];中国药学杂志;2006年20期
4 黄晖;陈燕萍;陈斌;苍鹏;;MRI定量测定在良性前列腺增生的初步应用[J];实用放射学杂志;2007年05期
5 傅毅博;;选择性前列腺激光气化术对比经尿道前列腺电切术的非随机试验[J];临床泌尿外科杂志;2007年08期
6 寿仁国;;金匮肾气丸加味治疗前列腺增生122例疗效观察[J];中国中医药科技;2010年05期
7 杨军昌;董焱鑫;钱云程;高晓康;霍双进;李东;;经尿道等离子前列腺电切术治疗良性前列腺增生1200例总结[J];中国内镜杂志;2010年09期
8 刘玉吉;赵广龄;;动式旋转磁性治疗良性前列腺增生[J];天津医药;1980年03期
9 苏大保;良性前列腺增生的治疗现状[J];临床泌尿外科杂志;1990年03期
10 苏汉文,李艳,徐朴;血清cPSA对前列腺癌诊断价值的研究[J];肿瘤防治研究;2003年03期
11 刘彩玲,孙路;电化学治疗良性前列腺增生60例报告[J];江西医药;2004年01期
12 束文慧,江振洲,张陆勇,刘国卿;良性前列腺增生治疗药物对前列腺细胞增殖与凋亡的影响[J];中国生化药物杂志;2004年03期
13 莫曾南,杨小丽,林伟雄,卢少明,陈坚;有无间质细胞共培养条件下良性前列腺增生上皮细胞基因差异表达[J];中华泌尿外科杂志;2004年08期
14 马景禄,刘君丽;~(192)Ir尿道内放射治疗良性前列腺增生31例报道[J];中华男科学;2005年04期
15 王海燕;丁瑜;;经尿道前列腺电切术治疗良性前列腺增生患者的护理[J];宁夏医学院学报;2007年01期
16 张祥华;;中国版良性前列腺增生临床诊治指南的制定[J];临床药物治疗杂志;2007年02期
17 蒋利琳;;良性前列腺增生等离子切除术的护理[J];川北医学院学报;2007年02期
18 任亮;;多沙唑嗪与其他治疗良性前列腺增生药物的安全性比较[J];中国男科学杂志;2007年03期
19 王建军;赵作辉;孙波;姜亭起;王万利;;经尿道等离子体双极电切术治疗良性前列腺增生[J];中华男科学杂志;2007年10期
20 那彦群;;我国良性前列腺增生临床治疗现状及思考[J];中华外科杂志;2007年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾金铭;张亚强;郭军;吕延伟;李国信;;前列闭尔通栓治疗良性前列腺增生临床观察[A];21世纪男科学——中华医学会第五次全国男科学学术会议论文集[C];2004年
2 王俊;郑海兰;刘学勇;甘玲;张守信;唐小秋;张红欣;;高能聚焦超声治疗良性前列腺增生47例临床观察[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年
3 杨小丽;莫曾南;卢少明;庞友红;付伟金;李钟;黄逢雨;宣强;;良性前列腺增生组织上皮细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定[A];21世纪男科学——中华医学会第五次全国男科学学术会议论文集[C];2004年
4 陈彦博;陈其;周娟;王忠;;HOLEP和PKRP治疗良性前列腺增生的疗效观察[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
5 付军红;何有华;吴道珠;;BPH患者前列腺内腺动脉血流阻力指数的测定及临床意义(摘要)[A];2009年浙江省男科、泌尿外科学术年会论文汇编[C];2009年
6 魏勇;曹林升;毛厚平;薛学义;周辉良;郑清水;罗义麒;;经尿道前列腺腔内剜除法电切术治疗Ⅳ度良性前列腺增生安全性及疗效的研究[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年
7 杜广辉;叶章群;曾晓勇;曾进;王涛;陈忠;蔡丹;杨为民;;120瓦绿激光汽化切除术治疗前列腺增生的初步临床研究[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年
8 魏勇;毛厚平;薛学义;郑清水;周辉良;曹林升;罗义麒;江涛;许宁;吕夷松;黄金杯;高锐;唐松喜;林曦;;经尿道前列腺腔内剜除法电切术治疗良性前列腺增生(附209例报告)[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
9 程沛;;经尿道前列腺汽化电切术治疗高危良性前列腺增生的疗效[A];外科重症监护专科知识培训暨学术交流会论文集[C];2008年
10 陈璐;成海燕;于建春;尚磊;温明菲;姜明孝;刘阿庆;郑成瑶;许文斌;刘云鹤;韩景献;;良性前列腺增生1例针灸治验[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 毕罡;Claudin-3作为候选癌标在前列腺癌诊治中的应用研究[D];第三军医大学;2008年
2 顾恒;碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β_1在良性前列腺增生中表达和作用的实验研究[D];第二军医大学;2003年
3 张彤;前列腺癌与良性前列腺增生差异表达基因的筛选及相关研究[D];天津医科大学;2005年
4 肖丹;蜘蛛香提取物抗良性前列腺增生的作用及机理研究[D];成都中医药大学;2005年
5 原公强;高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响[D];青岛大学;2006年
6 雷学成;前癃通胶囊对良性前列腺增生的临床观察和大鼠前列腺IGF-ⅠmRNA/IGF-ⅠRmRNA、Fas/Fas1表达的影响[D];湖南中医药大学;2011年
7 陈楠;炎症相关性细胞因子与糖尿病大鼠视网膜血管渗漏[D];青岛大学;2004年
8 吕飒;暴发性肝衰竭小鼠模型中肿瘤坏死因子α对血脑屏障通透性及紧密连接蛋白occludin表达的影响[D];中国医科大学;2005年
9 徐海峰;高糖对视网膜色素上皮屏障与转运功能的影响[D];青岛大学;2005年
10 魏一强;蟾蜂栓对良性前列腺增生生长因子及其受体表达影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡苏明;经尿道钬激光前列腺剜除术治疗良性前列腺增生的疗效评价[D];浙江大学;2010年
2 梁鲁南;良性前列腺增生VEGF和Flt-1表达及其与MVD关系的研究[D];重庆医科大学;2002年
3 李文吉;尿动力学检查在良性前列腺增生致膀胱逼尿肌功能变化检测中的应用[D];吉林大学;2005年
4 罗茂华;萘哌地尔治疗良性前列腺增生的临床研究[D];武汉大学;2005年
5 田旭升;前列Ⅱ号治疗良性前列腺增生症的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2002年
6 桑迎霞;高选择性的治疗良性前列腺增生药物Harnal的合成及工艺研究[D];沈阳药科大学;2003年
7 喻燕波;前列腺干细胞抗原和前列腺特异性抗原在前列腺癌组织中的表达及意义[D];江西医学院;2004年
8 李妍;荨麻多糖提取分离、结构分析及功能的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
9 况刚;以5α-还原酶为靶点研究肉豆蔻改善良性前列腺增生的作用[D];成都中医药大学;2005年
10 吴先奇;通关胶囊对良性前列腺增生的作用及机理的实验研究[D];成都中医药大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 上海交通大学第六人民医院泌尿外科 俞建军;防治良性前列腺增生[N];家庭医生报;2009年
2 杨罗艳;良性前列腺增生病[N];大众卫生报;2003年
3 鲁海红;消除良性前列腺增生的痛苦[N];科技日报;2001年
4 首都医大附属同仁医院泌尿外科主任 陈山;良性前列腺增生诊治要点[N];健康报;2008年
5 丁燕宁;中老年人应关注良性前列腺增生[N];科技日报;2008年
6 李颖 通讯员 王勋彪;辉瑞研制出良性前列腺增生药物[N];科技日报;2004年
7 徐文瑞;对付良性前列腺增生办法多[N];医药经济报;2001年
8 本报记者 白毅;良性前列腺增生联合用药疗效佳[N];中国医药报;2010年
9 刘申安;前列腺增生四问[N];医药养生保健报;2008年
10 莫秋;我国首个大型良性前列腺增生实效研究结果表明: 5-α还原酶抑制剂联合用药方案临床获益确切[N];中国医药报;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978