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淋巴毒素A基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的关系

赵燕  
【摘要】: 背景慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以气流受限为特征的慢性呼吸系统疾病,慢性气道炎症是COPD的病理基础,炎症因子在COPD的发生和发展中起重要作用[1]。研究证明COPD是一种多基因疾病,具有遗传易感性[2-5]。骨质疏松是一种多基因调控的骨代谢性疾病,也具有明显的遗传倾向。近来研究证实,COPD继发的骨质疏松患病率明显高于同龄健康人,说明COPD和骨质疏松两者之间存在某种联系。既然遗传因素在这两种疾病的发生过程中都有作用,有必要对COPD病人并发骨质疏松的遗传因素进行进一步探索。了解哪些COPD病人更易于继发骨质疏松,对于CODP病人的个体化治疗具有重要意义。淋巴毒素A(LTA)是一种重要的炎症介质,参与调控B淋巴细胞、T淋巴细胞的免疫调控和局部炎症反应[6]。同时慢性炎症反应也是骨质疏松的原因之一。因此本研究拟通过中国北方汉族健康个体和COPD患者LTA基因型分析,探讨LTA基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性、严重程度及骨质疏松的关系。 目的了解中国北方汉族COPD患者LTA基因多态性与COPD遗传易感性及其发展进程、COPD患者并发OP的关系,对揭示汉族人群COPD的发生发展机制提供理论基础。从而对于指导临床治疗、预测预后提供一个新的思路。 方法 1.病例组为163例COPD患者,对照组为随机抽样的163例健康人。在163例COPD患者中有122例患者进行肺功能检查并进行了严重程度的分级,此外,该样本中有101名患者进行了骨质疏松测定。 2. DNA的提取采用酚-氯仿法从病人和对照的外周血中提取基因组DNA。 3. tSNP的选择参考序列取自人类单体型计划数据库Chr6_31647542-31650100),共2 959bp,采取Tag SNP Picker程序确定rs2844482(S1)、rs2071590(S2)、rs2239704(S3)、rs2229094(S5)、rs1041981(S6)作为tSNP用于基因型分析,另外增加了一个已知功能SNP[rs909253(S4)]进行基因型分析。 4.基因型分析采用PCR直接测序法。采用Primer 3软件设计引物,采用降落时PCR对目的片段进行扩增,PCR产物直接测序,测序文件用Codon Code Aligner软件读取,直接从测序峰图确定等位基因的基因型。 5.用χ~2检验对照组人群各基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,以判断所选人群是否存在基因型或等位基因的分布偏差,从而确定其对整体人群的代表性。对于危险度的估计分析,采用非条件logistic回归模型计算比数比(Odds Ratios, OR)及95%可信区间(Confidential Intervals, CI)。所有统计皆采用SNPanlyzer6.0软件进行分析。检验显著性水准均采用α=0.05。 结果 1. COPD病人组与对照组所有标本均进行了基因型分型,只有少量样本分型未成功,所有重复分型结果均与原结果相符。经卡方检验,健康对照组LTA 6个SNP基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(p0.05);病人组3个SNP Hardy-Weinberg检验不平衡。 2. LTA 6个SNP基因型频率在COPD病人组与对照组之间均无显著性差异。 3.根据肺功能损害的严重程度将病人组中122名COPD病人分成轻、中、重、极重(死亡)四组,轻度和中重度组(中度、重度和极重度组)比较发现: rs2071590, rs2239704, rs909253, rs1041981基因型分布频率和等位基因分布频率存在明显差异。rs2071590 SNP呈隐性模式; rs909253, rs1041981 SNP呈显性模式;rs2239704 SNP呈共显性模式。 4. LTA 6个SNP基因型频率在COPD病人合并骨质疏松组与COPD病人未合并骨密度组之间均无显著性差异。 结论 1.本研究结果表明,中国北方汉族LTA基因存在明显基因多态性,LTA的基因多态性与COPD的易感性无关。 s2.本研究结果表明,在常见危险因素如年龄,吸烟及病程相当的情况下,COPD患者病情是否由轻度迅速进展到中度及重度以上,与LTA基因的多态性存在明显的相关性。因此LTA可能是影响COPD进程的重要因素之一。 3.本实验发现LTA的基因多态性与COPD患者并发骨质疏松的风险无明显相关。


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