收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

一些重要基因多态性与严重创伤患者并发症风险性的关联研究

顾玮  
【摘要】: 研究背景: 严重创伤是青年人首要死亡原因,已成为世界第三大常见死亡原因。在第一时间获救的严重创伤患者往往在伤后并发脓毒症和多器官衰竭等严重并发症,并最终死亡。创伤后并发症发病率高、死亡率高、治疗费用高的“三高现象”,对人类健康和社会经济发展已构成巨大的负面影响,因而是目前全球范围内危重病医学领域内亟待解决的重大科学问题。虽然目前脓毒症的治疗方法众多,但是脓毒症的治疗水平并无明显的提高。其关键问题在于目前脓毒症的治疗都是在脓毒症发生后。由于缺乏能早期判断脓毒症风险性的预警诊断方法,因而难以在脓毒症发生前或发生即刻进行预防或早期治疗。 细胞因子是脓毒症病理过程中重要的效应分子,直接反映机体的免疫应答类型;而模式识别受体是脓毒症发生早期,机体识别病原菌分子,并做出迅速免疫应答的第一道防线。因此,本研究拟从细胞因子和模式识别受体入手,选择一些脓毒症相关的重要基因及多态性位点,通过生物信息学预测、体外功能验证和临床关联研究,明确其功能意义和临床预警诊断价值,从而探寻脓毒症早期诊断方法,以达到减少或减轻危重病人并发脓毒症,进一步提高临床危重病人的救治水平的目的。 材料与方法: 1.样本:本研究共收集656例样本,分别采自348例健康志愿者和308例严重创伤患者。所有人均为居住在重庆的中国汉族人,相互间无血缘关系。348例健康志愿者中男性219例,女性129例,平均年龄为25岁(18-53岁),均为志愿献血者。308例严重创伤患者样本(男性242例、女性46例),于2005年1月至2008年1月间从大坪医院和重庆市急救中心收集。患者纳入标准为:(1)创伤后24小时内;(2)ISS评分≥16分或AIS评分≥3分;(3)年龄≥16岁且≤70岁,性别不限;(4)存活时间超过1周。其平均年龄38.5岁,平均创伤严重程度评分(Injury severity score,ISS)为25.5分。 2.基因测序与生物信息学分析:为筛查中国汉族人群中IL-6基因启动子区SNPs分布情况,取27例中国汉族健康人DNA样本,对IL-6基因启动子区-2996~+53bp区域(参考序列Y00081.1)进行双向直接测序。将测序结果构建重叠群,进行多重比对,寻找SNPs位点。利用在线生物信息学软件(http://125.itba.mi.cnr.it/genebin/wwwrepeat.pl和http://motif.genome.ad.jp/)对测序发现的-572C/G进行分析,观察其是位于重复序列内,还是位于重要的表达调节部位或其附近,以及碱基改变是否会影响转录因子结合位点变化,从理论上初步分析其生物学意义。 3.报告基因实验:为进一步明确-572C/G对IL-6启动子活性的影响,用PCR方法以野生型DNA样本为模版,扩增IL-6启动子-1728~+36bp片段,构建pGL3BH-CC质粒。通过定点突变,构建pGL3BH-GG质粒。将两种质粒转染至U-937和K-562细胞系中,通过化学发光检测仪观察碱基改变对启动子活性的影响。 4.基因芯片制备:为建立高通量基因分型技术平台,根据选择的9个细胞因子和13个SNP位点,分别设计一对PCR扩增引物和两条杂交探针。按设计的芯片矩阵将探针点制在芯片上,并与多重PCR产物杂交。待玻片晾干后用ScanArray 3000扫描仪扫描,ImaGene软件分析扫描结果。通过改变PCR条件、杂交温度优化实验条件。 5.基因分型:分别采用RFLP-PCR(CD14/-159、-1145,MD-2/-1625、IL-6/-572)和SNP芯片(13个细胞因子SNPs)进行基因分型,芯片分型结果用ScanArray 3000扫描仪扫描,ImaGene软件分析。基因分型结果均通过随机抽取10例样本测序确认。 6.细胞因子表达水平检测:取严重创伤患者入院后第一天全血,100ng/ml LPS刺激4小时后,离心收集血浆。用ELISA方法检测血浆细胞因子表达水平。 7.临床关联研究:脓毒症诊断标准:(1)有病原菌培养证据;(2)体温高于38.5℃或低于36.5℃;(3)白细胞计数高于10×109/L或低于4×109/L。根据患者呼吸功能(氧合指数)、肾功能(血浆肌酐浓度)、肝功能(血浆胆红素浓度)、心血管功能(血压调整后心率)、凝血功能(血小板计数)和中枢神经系统(格拉斯哥评分)等变化计数器官功能障碍评分。创伤ISS评分采用简明损伤定级标准(1998版)。 8.统计分析:各SNP的等位基因型频率由基因计数获得。H-W平衡采用卡方检验计算。组间荧光素酶活性通过单因素方差分析比较。多态性与MODS评分、细胞因子表达水平间的关系采用单因素方差方法统计。等位计量效应采用线性回归分析统计,并用年龄、性别及ISS评分校正。显性及隐性遗传模式下各基因型与脓毒症发生率之间的关系采用卡方检验方法统计。等位计量效应采用多重Logister回归分析计算,并对年龄、性别及ISS评分校正。检验效能通过在线软件Power and Sample Size Program software (http://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize)计算。 结果: 1.通过对中国汉族重庆人群IL-6启动子区SNP筛查,发现中国汉族人群中IL-6启动子区仅含有-572C/G多态性位点,发生频率为23.8%。未发现在西方人群中普遍存在的-597和-174位点多态性。生物信息学分析显示IL-6 -572位点不位于重复序列内,且可能引起转录因子结合位点改变。通过报告基因实验和血浆IL-6表达水平检测,发现含-572C的质粒转录活性明显高于-572G质粒,携带-572G个体血浆IL-6表达水平明显低于-572C个体,且呈等位剂量效应关系。临床关联研究证实携带IL-6/-572G突变等位基因的创伤病人脓毒症发生率明显低于IL-6/-572C携带者。-572G位点与创伤病人的MODS评分降低有一定关系,但各基因型组间无明显差异。 2.研制出检测13个细胞因子SNP(IL-1α-889C/T,IL-1β-1470G/C、-511C/T、-31C/T,IL-4 -589T/C,IL-6 -572C/G,IL-8 -251T/A,IL-10 -1082A/G、-819T/C、-592A/C,TNF-α-308G/A,TNF-β252G/A,IFN-γ874A/T)的SNP芯片,重复性达到96%以上,准确率达到100%。通过分析各基因型与细胞因子水平、脓毒症发生率和MODS评分间关系,筛选出8个与三者关系最为密切的多态性位点(IL-1β-1470G/C、-511C/T、-31C/T, IL-4 -589T/C, IL-6 -572C/G, IL-8 -252T/A, IL-10 -819T/C, TNF-α-308G/A)。各患者所含这8个SNPs中高反应性基因型的数量越多,则其脓毒症发生率越高,同时MODS评分也越高。 3.通过对105例严重创伤患者进行基因分型,发现CD14/-1145、-159和MD-2/-1625多态性发生频率分别为42.9%、47.6%和22.4%,均为高频SNP位点,且与健康人群中发生频率相似。CD14/-1145A、-159C携带者创伤病人MODS评分和脓毒症发生率低于野生型等位基因携带者,且两个位点具有协同效应。同时,证实MD2/-1625G突变等位基因携带者创伤病人MOD评分和脓毒症发生率明显高于野生型等位基因携带者。 结论: 1.中国汉族人群中IL-6基因启动子区仅存在-572C/G多态性位点,未发现西方人群中存在的-597和-174多态性位点。IL-6/-572C→G变异能明显降低启动子活性、抑制IL-6基因转录,为功能性多态性位点。 2.成功研制出检测9个细胞因子基因、13个SNPs位点的SNP芯片。 3.利用SNP芯片,筛选出能预测严重创伤患者并发症风险性的8个细胞因子多态性位点(IL-1β-1470G/C、-511C/T、-31C/T, IL-4 -589T/C, IL-6 -572C/G, IL-8 -252T/A, IL-10 -819T/C, TNF-α-308G/A),以及各多态性位点间协同效应与并发症风险程度的关系。 4.利用临床关联研究,进一步明确模式识别受体CD14 -159、-1145和MD-2 -1625对于判断严重创伤患者并发症风险性也具有重要意义。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郭义峰,谭建明,李荣宇,刘三震,李瑶,应康,谢毅,毛裕民;寡核苷酸芯片在细胞因子及其受体单核苷酸多态性检测中的应用[J];中华医学杂志;2005年25期
2 韩溟;林哲绚;丁山;;血浆NGAL在创伤脓毒症诊断中的作用研究[J];创伤外科杂志;2011年03期
3 邢培祥;邹明瑾;邢全台;王洪春;汪运山;;前炎性细胞因子基因多态性与乙型肝炎病毒感染的关系[J];山东大学学报(医学版);2007年12期
4 姚华;李玉华;朱滨;吴晓华;陆胜德;;非酒精性脂肪性肝病相关基因的单核苷酸多态性研究[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
5 林连捷;刘香;郑长青;金玉;胡刚正;林艳;;基因芯片分析亚洲人胰腺癌细胞株纯合性缺失[J];中国现代医学杂志;2008年11期
6 林连捷;谭明旗;郑长青;刘香;金玉;林艳;;应用高密度单核苷酸多态性芯片分析胰腺癌细胞基因缺失[J];中国医科大学学报;2008年03期
7 杨军;田兆方;;连续性血液净化治疗对儿童严重脓毒症患儿外周血炎症因子的影响[J];南方医科大学学报;2010年04期
8 罗冰;熊明媚;周嘉敏;李仕成;黄东健;;改良无抗凝HF对MODS凝血功能及细胞因子的影响[J];热带医学杂志;2010年07期
9 钟文筠,周君桂,庞战军;妊娠高血压综合征胎盘中病理相关基因的表达改变[J];中国优生与遗传杂志;2005年08期
10 冷建春;王卫星;李巧林;李军;陈绍宏;;清瘟败毒饮治疗脓毒症疗效观察及对细胞因子的影响[J];中国中医药信息杂志;2009年06期
11 潘娅静;徐建国;赵洁;;血必净注射液对脓毒症细胞因子的影响和肾保护作用[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年02期
12 花天放;创伤病人内脏蛋白质对肠道和静脉营养以及脓毒症的反应[J];国外医学.骨科学分册;1995年03期
13 张海鹰,李新建,丁广治,孟宪钧;炎性细胞因子活性及其基因表达监测在脓毒症抗炎症治疗中的意义[J];中华医学杂志;1999年10期
14 曹红卫,郭毅斌,王宁,魏利召,王俊,周红,郑江;青蒿素对脓毒症大鼠的保护作用[J];第三军医大学学报;2005年17期
15 孙成栋;张淑文;董军;;脓毒症临床实验免疫指标研究进展[J];中国危重病急救医学;2005年12期
16 贾敏;杨铁虹;潘峰;罗晓星;;当归精油对脓毒症小鼠的治疗作用[J];中国临床药理学与治疗学;2007年12期
17 刘存刚;李金恒;孙胜利;曹晓梅;;三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备与优化[J];中国药理学通报;2008年02期
18 张佃良;基因芯片技术在脓毒症中的应用[J];肠外与肠内营养;2002年01期
19 刘敬臣;王海棠;王维;;丙氨酰谷氨酰胺对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用(英文)[J];中南大学学报(医学版);2008年12期
20 刘靖华;李志杰;唐靖;刘亚伟;赵雷;邓鹏;姜勇;;高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应[J];中华医学杂志;2006年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谢焱;周新;邓冠华;刘松梅;;2型糖尿病相关基因SNP位点基因芯片筛查[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
2 张振辉;林珮仪;陈晓辉;江慧琳;李艳玲;王华军;;巨噬细胞移动抑制因子在脓毒症小鼠心和肾组织中的表达[A];《中华急诊医学杂志》第八届组稿会暨急诊医学首届青年论坛论文汇编[C];2009年
3 李志军;盖慧荣;薛永来;冯喜增;;脓毒症大鼠肝组织基因表达的研究[A];浙江省中西医结合学会急救医学专业委员会第三次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2007年
4 李金恒;刘存刚;孙胜利;曹晓梅;;三维凝胶NAT2基因分型芯片的制备与优化[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年
5 李志军;;血必净联合连翘注射液对脓毒症大鼠影响的肝基因芯片研究[A];2009年全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2009年
6 雒云祥;周领;任新生;;脓毒症与肠屏障功能障碍研究现状[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
7 田雨;朱玲;陈浩;唐斌擎;陈宝瑾;杨婕;方邦江;;脓毒方治疗重症脓毒症30例临床研究[A];2011·中国医师协会中西医结合医师大会论文集[C];2011年
8 叶振海;宋冬梅;曹相原;;重症急性胰腺炎并发脓毒症临床观察[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
9 卢中秋;邱俏檬;梁欢;李海燕;胡国新;李景荣;王明山;;大鼠创伤弧菌脓毒症血清细胞因子动态变化的实验研究[A];《中华急诊医学杂志》第五届组稿会论文汇编[C];2006年
10 曾灵;蒋建新;;LBP基因标签SNP的筛选及其与严重创伤后脓毒症的关联性[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 顾玮;一些重要基因多态性与严重创伤患者并发症风险性的关联研究[D];第三军医大学;2008年
2 段朝霞;TLR4、GR基因多态性分析及TLR4基因3’UTR 11 367多态性位点功能研究[D];第三军医大学;2007年
3 周黎明;大黄素作用于大鼠重症急性胰腺炎的分子机理研究[D];四川大学;2006年
4 吕铁明;肾移植供、受者细胞因子及其受体基因多态性与表达水平研究[D];复旦大学;2005年
5 陈蔚;黄芪多糖对NOD小鼠1型糖尿病的预防作用及其机理研究[D];复旦大学;2004年
6 李铁军;内源性抗炎细胞因子对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究[D];第二军医大学;2004年
7 齐弘炜;体外循环前后心肌及外周血单个核细胞细胞因子基因表达谱的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
8 孙波;基因芯片技术在子痫前期外周血白细胞差异表达基因研究中的初步应用[D];吉林大学;2006年
9 李源;杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因与子痫前期相关性的研究[D];吉林大学;2007年
10 王鑫;鼻息肉组织免疫相关基因的表达谱[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王志富;基于候选基因策略的脓毒症遗传易感性研究[D];中国协和医科大学;2009年
2 赵雷;人高迁移率族蛋白1的克隆、表达及其功能研究[D];第一军医大学;2005年
3 李巧林;清瘟败毒饮对脓毒症的疗效观察及细胞因子的影响[D];成都中医药大学;2007年
4 王晓琳;清瘟败毒饮对脓毒症患者临床疗效及细胞因子的影响[D];成都中医药大学;2008年
5 谢颖光;血必净注射液治疗脓毒症的临床研究及免疫调节机制探讨[D];山东中医药大学;2007年
6 刘勇;脓毒症大鼠心脏组织基因表达变化的研究[D];福建医科大学;2008年
7 陈云艳;姜黄素衍生物FM0815对脓毒症模型的防治作用研究[D];福建医科大学;2009年
8 姜妮;新型SNP检测芯片的制备及其在恶性血液病相对风险度检测中的应用[D];东南大学;2005年
9 杨孟选;脓毒症及多器官功能障碍综合征白细胞介素-6表达及易感性研究[D];郑州大学;2007年
10 吕晨;β防御素1基因单核苷酸多态性与脓毒症发生发展的相关性研究[D];浙江大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 任壮;聚焦脓毒症治疗策略[N];中国中医药报;2010年
2 张荔子;脓毒症研究取得新进展[N];健康报;2002年
3 ;与“死神”作理性的抗争[N];中国医药报;2003年
4 吴一福;细胞因子与病理性瘢痕形成密切相关[N];中国医药报;2005年
5 张献怀;探讨创伤脓毒症基因机制[N];大众科技报;2003年
6 赵喜明;儿童癫痫病因新解[N];中国医药报;2004年
7 盛志勇;脓毒症与多器官功能障碍综合征[N];健康报;2005年
8 杨慎峭 刘旭光 余曙光;艾灸治疗关节炎机制与细胞因子有关[N];中国医药报;2005年
9 许沈华;肿瘤基因疫苗已见端倪[N];家庭医生报;2007年
10 新言;中医证的本质是细胞因子吗?[N];科技日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978