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三七总皂苷活性代谢单体对泡沫细胞形成影响及机制研究

李卓莹  
【摘要】: 三七是我国常用的传统中药,为五加科(Araliaceae)人参属三七[Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen]的干燥块根,味甘,微苦,性温,归肝、胃经,主产于云南、广西及四川等地,具有止血化瘀、活血定痛等功效。三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)是三七的主要活性部位,长期应用于心血管疾病的防治中,并有显著效果,其药理作用已被广泛深入的研究,本室既往研究表明,PNS可以有效防治动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发生发展。 PNS作为中药三七的有效部位,其成分非常复杂,开发利用PNS组份中的单体成分及对其活性代谢单体的研究已成为近年来中药现代化研究的热点。在对其单体组份的研究中发现,单体组份及其配伍只能部分的反应出PNS的药理作用。另外,某些既往被认为有重要作用的单体口服后并不能以原型进入血液循环发挥其药理作用,如Paek IB等发现,口服Rb1后血液中未检测出Rb1,只测出其代谢终产物;Kanaoka M等应用EIA-HPLC技术对58例1-64岁健康志愿者血液中的药物成分进行检测发现,口服红参后血液中未检测出传统被认为有活性作用的Rb1;Akao T等也发现,给肠道无微生物小鼠口服Rb1后,血液中未检测出Rb1及其代谢产物。上述研究表明,口服PNS或Rb1后,Rb1本身难以通过胃肠道吸收入血,而是经过肠道内微生物代谢后方被吸收,继之产生抗AS等药理作用。为此,本室与企业合作,利用模拟生物体肠道微生态环境反应技术制备出了三七总皂苷活性代谢单体NG701和NG801。NG701是二醇型皂苷Rb1在人肠道内的代谢产物,NG801是三醇型皂苷Rg1在人肠道内的代谢产物,目前对他们在抗AS方面作用的研究未见报道。 AS是多种心血管疾病的共同病理基础,严重威胁着人类的健康。研究表明,巨噬细胞源性泡沫细胞形成是AS形成的启动因素,对病变形成后的发展和转归有重要作用。 为此,本研究通过体外培养巨噬细胞源性泡沫细胞,观察NG701、NG801对泡沫细胞形成情况的影响,并以ABCA1、LXRα、HMG-CoA还原酶、CD36 mRNA在泡沫细胞内的表达为指标对其机制进行了初步的探讨。 方法 1.体外培养大鼠巨噬细胞,将各剂量NG701(3、10、30μmol/L),NG801、Rb1、Rg1(3、10、30、100μmol/L)及氧化低密度脂蛋白与巨噬细胞共孵育24h。油红“O”染色观察细胞内脂质堆积情况。 2.酶法测定细胞内总胆固醇(TC)的含量。 3.采用real time-PCR法检测泡沫细胞内ABCA1、LXRα、HMG-CoA还原酶、CD36 mRNA表达情况。 结果 1.光镜下观察发现,对照组细胞形态多呈圆形及梭形,油红“O”染色无着色;模型组油红“O”染色阳性细胞遍布,且细胞体积明显增大,形态多呈圆形;NG701给药浓度为10、30μmol/L时,细胞内红染的圆形颗粒比模型组明显减少,且细胞形态渐趋正常。 2. NG801给药浓度为30、100μmol/L时,细胞内红染的圆形颗粒比模型组明显减少,且细胞形态渐趋正常。 3.模型组细胞内TC水平显著高于对照组(P0.01);与模型组相比,细胞内总胆固醇含量与NG701的给药浓度呈剂量依赖性的降低,NG701在浓度为10μmol/L时即能显著的降低泡沫细胞内TC水平。 4. NG801在浓度为30μmol/L时细胞内TC水平比模型组明显降低(P0.05);在100μmol/L时细胞内TC水平比模型组显著降低(P0.01)。 5.与模型组相比,NG701组在浓度为3μmol/L时,对细胞内CD36、LXRα、ABCA1、HMG-CoA还原酶mRNA的表达无影响;10μmol/L时,可下调CD36 mRNA(P0.01)、HMG-CoA还原酶(P0.01)mRNA的表达,上调LXRαmRNA(P0.05)、ABCA1 mRNA(P0.01)的表达;30μmol/L时,可下调CD36 mRNA(P0.01)、HMG-CoA还原酶(P0.01)mRNA的表达,上调LXRαmRNA(P0.01)、ABCA1 mRNA(P0.01)的表达。 6.与模型组相比,NG801组在浓度为3、10μmol/L时,对细胞内CD36、LXRα、ABCA1、HMG-CoA还原酶mRNA的表达无影响;30μmol/L时,可下调CD36 mRNA(P0.01) ,上调LXRαmRNA(P0.05)、ABCA1 mRNA(P0.01)的表达,对HMG-CoA还原酶mRNA的表达无影响;100μmol/L时,可下调CD36 mRNA(P0.01)、HMG-CoA还原酶(P0.01)mRNA的表达,上调LXRαmRNA(P0.01)、ABCA1 mRNA(P0.01)的表达。 结论 1. NG701、NG801能剂量依赖性的减少巨噬细胞源性泡沫细胞内总胆固醇的含量,经NG701、NG801处理后的泡沫细胞,其细胞内红染物质减少,细胞形态渐趋正常。且NG701、NG801活性分别显著高于其原型药Rb1、Rg1。 2. NG801、NG701可以通过下调泡沫细胞内CD36 mRNA的表达,抑制细胞对外源性胆固醇的摄取;上调ABCA1 mRNA、LXRαmRNA的表达,促进细胞内胆固醇的外流;及下调HMG-CoA还原酶mRNA表达,抑制内源性胆固醇的合成。从不同环节上减少巨噬细胞内胆固醇蓄积,影响泡沫细胞的形成。


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1 李卓莹;三七总皂苷活性代谢单体对泡沫细胞形成影响及机制研究[D];第三军医大学;2009年
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