收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Egr-1介导胶质瘤细胞内Survivin促进血管形成的实验研究

王鹏  
【摘要】:恶性脑胶质细胞瘤是颅内常见的原发肿瘤,外科手术结合术后放疗、化疗,患者的中位生存时间一般少于18个月。因此迫切需要对其发病机理及治疗环节进行较为系统的研究,寻找新型的治疗方式,突破目前治疗中遇到的瓶颈,以提高恶性胶质细胞瘤患者的生存时间和生活质量。 血管形成是一个复杂的生理进程,是指诱导已经存在的血管,形成新生血管的过程。正常条件下,血管形成被严格调控并在刺激因素和抑制因素之间维持一个动态平衡。当刺激因素占据优势地位(血管形成启动),就会导致一系列级联反应(基底膜降解,内皮细胞迁移、增殖及管腔形成)的发生。胶质细胞瘤属于血管增殖极为活跃的实体瘤,血管形成在胶质细胞瘤的进展中发挥重要作用。 Survivin是IAP家族最小的成员,具有抗细胞凋亡及促进有丝分裂的功能。并且Survivin在肿瘤组织中高表达、于正常的终末分化组织中为低表达的特点,使之有望成为肿瘤治疗的新靶点。我们在前期的研究中发现胶质瘤细胞中的Survivin与胶质细胞瘤的病理级别呈正相关,和胶质细胞瘤中的微血管密度亦呈正相关,并且干扰胶质瘤细胞中的Survivin,不仅可以抑制胶质瘤细胞的增殖,降低其在裸鼠中的成瘤性,并且可以降低移植瘤组织中的微血管密度,这提示我们在胶质瘤细胞中的Survivin有可能参与瘤组织中血管形成的调节。但是据此尚不能确定胶质瘤细胞中的Survivin对瘤组织内血管形成的作用。根据以往文献报道,野生型Survivin可以上调胰岛素细胞中Egr-1的表达。Egr-1是一个重要的转录因子,很多促血管形成因子的启动子区都有Egr-1的结合位点。据此我们推测胶质瘤细胞中的Survivin可以通过Egr-1来调控胶质瘤细胞中促血管形成因子的表达及分泌,进而促进胶质细胞瘤中的血管形成。 目的:探索胶质瘤细胞中的Survivin是否可以影响瘤组织中的血管形成,并探讨其发挥作用的机制。 方法:采用脂质体法,将Survivin的真核表达载体pcDNA3.1-Survivin、Egr-1的真核表达载体pcDNA3.1-Egr-1、同时携带Survivin和Egr-1 shRNA表达框的真核表达载体pcDNA3.1-Survivin-Egr shRNA及空载体pcDNA3.1分别转染SHG44细胞,将Survivin的干扰载体pRNAT-Survivin shRNA、Egr-1的干扰载体pRNAT-Egr-1 shRNA及无关插入序列载体Prnat-NS si和空载体pRNAT-U6.1/Neo分别转染U251细胞,通过G418筛选出稳定转染不同克隆的细胞系。分别采用MTT法、Transwell小室、血管管状形成实验,检测亲代SHG44细胞、转染Survivin的SHG44细胞、亲代U251细胞、抑制Survivin的U251细胞对HUVECs增殖、迁移及形成血管功能的影响。采用qPCR检测各组细胞中三种促血管形成因子VEGF、bFGF和PDGF的mRNA水平,采用Western blot检测各组细胞中三种促血管形成因子VEGF、bFGF和PDGF的蛋白表达水平,采用ELISA方法检测三种促血管形成因子VEGF、bFGF和PDGF在相应细胞培养液上清中的水平。将各组细胞接种于裸鼠背部,构建荷瘤裸鼠模型,观察各组瘤细胞的生长情况,并测定移植瘤体积,检测瘤组织内MVD、Ki67、Survivin、Egr-1及三种促血管形成因子VEGF、bFGF和PDGF的表达情况。 结果:将HUVECs和胶质瘤细胞共培养,强制表达Survivin的SHG44细胞对HUVECs增殖、迁移及血管形成的刺激作用明显强于亲代SHG44细胞,亲代U251细胞对HUVECs增殖、迁移及血管形成的刺激作用明显强于抑制Survivin表达的U251细胞。Western blot检测结果发现,转染Survivin的SHG44细胞中可以检测到bFGF表达,未检测出VEGF和PDGF表达,转染空载体的SHG44细胞和亲代SHG44细胞中始终未检测出VEGF、bFGF和PDGF表达;转染Egr-1的SHG44细胞中可以检测到VEGF和bFGF表达,未检测出PDGF表达,转染空载体的SHG44细胞和亲代SHG44细胞中始终未检测出VEGF、bFGF和PDGF表达。qPCR检测的VEGF、bFGF和PDGF转录水平,ELISA检测相应细胞培养液上清中VEGF、bFGF和PDGF的含量变化与Western blot检测的结果一致。Western blot检测结果发现,干扰Survivin表达的U251细胞中VEGF、bFGF表达下调,PDGF表达无变化,转染空载体、无关序列的U251细胞和亲代U251细胞中VEGF、bFGF和PDGF表达无变化;干扰Egr-1的U251细胞中VEGF和bFGF表达下调,PDGF表达无变化,转染空载体、无关序列的U251细胞和亲代U251细胞中VEGF、bFGF和PDGF表达无变化。qPCR检测的VEGF、bFGF和PDGF转录水平,ELISA检测相应细胞培养液上清中VEGF、bFGF和PDGF的含量变化与Western blot检测的结果一致。Western blot、qPCR和ELISA检测的结果显示,与强制表达Survivin的SHG44细胞相比,转染既表达Survivin同时干扰Egr-1表达的SHG44细胞中bFGF明显降低。将不同的细胞接种裸鼠后,转染Survivin或者转染Egr-1的SHG44细胞生长速度明显快于亲代SHG44细胞。干扰Survivin的U251细胞与亲代细胞相比,生长速度明显减慢,干扰Egr-1的U251细胞与亲代细胞相比的生长速度相比没有差异。转染既表达Survivin同时干扰Egr-1的SHG44细胞与强制表达Survivin的SHG44细胞相比,其生长速度明显减慢。Ki67的免疫组化检测结果显示,与亲代SHG44细胞相比,转染Survivin或转染Egr-1的SHG44细胞中的Ki67阳性细胞增多;与亲代U251细胞相比,干扰Survivin或干扰Egr-1的U251细胞中Ki67阳性细胞减少;转染既表达Survivin同时干扰Egr-1的SHG44细胞与仅转染Survivin的SHG44相比Ki67阳性细胞减少。MVD结果表明,与亲代SHG44细胞相比,转染Survivin或转染Egr-1的SHG44细胞中的MVD增多;与亲代U251细胞相比,干扰Survivin或干扰Egr-1的U251细胞中MVD减少;转染既表达Survivin同时干扰Egr-1的SHG44细胞与仅转染Survivin的SHG44细胞相比MVD减少。半定量免疫组化评分结果证明,与亲代SHG44细胞相比,转染Survivin的SHG44细胞中VEGF、bFGF、PDGF表达上调;转染Egr-1的SHG44细胞中VEGF、bFGF、PDGF表达上调;转染既表达Survivin同时干扰Egr-1的SHG44细胞与仅转染Survivin的SHG44相比,VEGF、bFGF、PDGF表达下调;与亲代U251细胞相比,干扰Survivin的U251细胞中VEGF、bFGF和PDGF表达下调;干扰Egr-1的U251细胞中VEGF、bFGF和PDGF表达下调。 结论:胶质瘤细胞中的Survivin在体外可以促进内皮细胞的增殖、迁移及管状形成等功能,在体内可以提高瘤组织内MVD。这些作用的发挥是通过胶质瘤细胞内的Survivin上调促血管形成因子VEGF、bFGF和PDGF的转录、翻译及分泌实现的。Survivin发挥促进这些因子的表达及分泌的功能时,需要转录因子Egr-1的介导。我们的实验首次证明了胶质瘤细胞中的Survivin,在转录因子Egr-1的介导下,可以促进瘤细胞中VEGF、bFGF和PDGF等因子的表达及分泌,进而促进胶质细胞瘤中的血管形成,这为抗Survivin的靶向治疗提供了理论基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 朱萧;李东培;;Nestin在神经胶质瘤研究中的作用[J];解剖学研究;2011年03期
2 侍孝红;王前玉;江小玲;吴骥;;Survivin在乳腺癌中表达的临床意义[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年11期
3 严海;张宇;于洪泉;齐玲;金宏;姜亚磊;胡晓勇;;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用[J];中国实验诊断学;2011年08期
4 王冠;郭佳奎;;胶质瘤抗血管生成治疗现状[J];天津医科大学学报;2011年02期
5 田薇;施公胜;黄华;王东林;;胶质瘤中CDK4和RASSF1A表达的相关性及意义[J];江苏医药;2011年12期
6 王洁;陈忠平;;miRNA在胶质瘤化疗耐药中的研究进展[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
7 冀保卫;陈谦学;田道锋;吴立权;刘宝辉;郭振涛;王龙;朱晓楠;张申起;;组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导脑胶质瘤细胞凋亡及其机制的研究[J];中国神经肿瘤杂志;2011年02期
8 杨洲;刚海菊;谢贤庸;张才全;;Survivin在结直肠癌中的表达及临床意义[J];华西医学;2011年08期
9 石文建;赵喜庆;杨利辉;李翠霞;;中药对胶质瘤作用研究进展[J];中华神经外科疾病研究杂志;2011年03期
10 朱侗明;何升学;胡新华;章文斌;;三种鼠脑胶质瘤模型的建立与比较[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2011年03期
11 王旭霞;赵曙光;刘震雄;李慧艳;王景杰;秦明;唐华;;食管癌VEGF和Survivin的表达与临床病理的关系[J];西南国防医药;2011年08期
12 詹奇;胡韶山;;抗VCAM-1单克隆抗体联合光动力疗法治疗大鼠C6脑胶质瘤的研究[J];中国激光医学杂志;2011年04期
13 李宁;夏燕;曹立宇;;STAT3和Survivin在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义[J];安徽卫生职业技术学院学报;2011年04期
14 尚君兰;李爱霞;毛兰萍;刘沛;刘晓锦;孙明磊;;Survivin在口腔扁平苔藓癌变过程中的表达[J];国际口腔医学杂志;2011年04期
15 蔡伟明;彭仕骏;吕文强;张志峰;;食道癌中miR-542-3p对Survivin基因的作用研究[J];中国医药科学;2011年11期
16 苑中甫;武继琳;;卵巢上皮性癌组织中Aurora-B和Survivin的表达[J];郑州大学学报(医学版);2011年04期
17 陈宏颖;王陆佰;;Survivin与PCNA蛋白在膀胱尿路上皮肿瘤的表达及意义[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年13期
18 李俊霞;;Survivin和Ki-67在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义[J];中国现代药物应用;2011年12期
19 温林豹;陈刚;;胶质瘤的治疗策略[J];中华神经外科疾病研究杂志;2011年04期
20 王超奇;王璠;梁姗;王明;于大海;;Survivin、Caspase-3、突变型p53在膀胱癌中的表达及预后意义[J];现代肿瘤医学;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李大伟;;P糖蛋白、Survivin在喉鳞癌中表达与细胞增殖、凋亡及预后的关系[A];第十次全国中西医结合耳鼻咽喉科学术会议论文汇编[C];2010年
2 包琳;;中医药对肝癌Survivin基因表达影响的研究探讨[A];第五届中国中西医结合围手术期医学研讨会论文集[C];2010年
3 ;A Single Amino Acid Change(Asp 53→Ala53) Converts Survivin from anti-apoptotic to proapoptotic[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
4 吕喜英;;Survivin与CD105在肺癌组织中的表达与预后的关系[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年
5 王晓娟;戴国仪;曹利民;朱慧芬;张悦;邵静芬;杨敬;沈关心;;Survivin反义核酸促进紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
6 王晓娟;赵晓萍;朱慧芬;张悦;邵静芳;杨敬;沈关心;;Survivin反义核酸促进紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年
7 孙慧;马杰;孙玲;刘林湘;邹典斌;刘少君;;Survivin、Bcl-2和VEGF在骨髓增生异常综合征中的表达及其相关性研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
8 张青云;李雪峰;徐建军;王雅明;;尿液中Survivin酶联免疫方法的建立及膀胱癌检测的初步应用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
9 李秀梅;王洪江;陈艳;李卉;庞作良;张丽萍;李惠武;;新疆哈萨克族食管癌中Survivin表达上调对细胞凋亡相关基因的影响研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
10 金晓东;李强;李萍;吴庆丰;陶家军;郝冀方;;Survivin表达对HepG2细胞高LET射线辐射敏感性的影响[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王鹏;Egr-1介导胶质瘤细胞内Survivin促进血管形成实验研究[D];第四军医大学;2010年
2 王鹏;Egr-1介导胶质瘤细胞内Survivin促进血管形成的实验研究[D];第四军医大学;2010年
3 李学元;mTOR信号通路和GOLPH3在人脑胶质瘤中的表达和临床意义[D];山东大学;2011年
4 杨彤涛;凋亡抑制基因survivin在人骨肉瘤组织中的表达及其RNA干涉的初步研究[D];第四军医大学;2004年
5 曹永倩;紫杉醇及survivin反义寡核苷酸对恶性黑色素瘤细胞作用的实验研究[D];山东大学;2010年
6 栾世海;MiRNA-126和miRNA-34a在胶质瘤细胞中功能的实验研究[D];复旦大学;2010年
7 范海涛;Survivin与VEGF的检测及二者反义寡核苷酸对膀胱癌的治疗研究[D];吉林大学;2010年
8 李红玲;Survivin在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其反义寡核苷酸对淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响[D];第四军医大学;2004年
9 马静;RNA干扰抑制survivin基因表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的实验研究[D];昆明医学院;2010年
10 朱晓东;Survivin在紫杉醇抗肿瘤机制中作用及其反义核酸干预胃癌形成的研究[D];复旦大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 康俊龙;Survivin、Caspase-3在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响[D];福建医科大学;2008年
2 田伟;shRNA干扰survivin基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡及抑制其增殖的实验研究[D];河北医科大学;2010年
3 孟葳;3.0TMRI弥散张量成像在脑肿瘤诊断及胶质瘤分级诊断的价值研究[D];广西医科大学;2010年
4 陈宝敏;胶质瘤干细胞生物学特性比较及放射耐受机制的初步研究[D];苏州大学;2010年
5 杨生军;~(11)C-蛋氨酸PET/CT及整合素β1表达与胶质瘤生物学行为的相关性研究[D];昆明医学院;2011年
6 徐海芳;神经胶质瘤Wnt信号通路抑制基因甲基化调控研究[D];河南大学;2010年
7 张栋梁;LY294002靶向抑制PI3K/AKT信号转导通路干预胶质瘤细胞生长的研究[D];河北大学;2011年
8 陈亮;CD82/KAI1和CD9/MRP-1在神经胶质瘤细胞株中的表达及表达意义的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
9 曹栓柱;Per1、Per2在体外培养的胶质瘤细胞和正常细胞中的表达的差异性研究[D];宁夏医科大学;2010年
10 高吉国;候选肿瘤抑制基因ECRG4抑制胶质瘤增殖及侵袭的研究[D];吉林大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 匡远深;让胶质瘤干细胞不再“繁殖”[N];健康报;2011年
2 衣晓峰 冯宇曦;中药三氧化二砷有望成为治疗胶质瘤新药[N];中国医药报;2011年
3 杨霞;新方法治疗脑胶质瘤[N];保健时报;2003年
4 ;丹参能显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞Survivin表达[N];中国中医药报;2005年
5 杨霞;光敏分子激光靶向治疗脑胶质瘤[N];中国医药报;2003年
6 记者 衣晓峰 通讯员 冯宇曦;砒霜对脑胶质瘤有良好疗效[N];健康报;2011年
7 记者 衣晓峰 靳万庆 通讯员 冯宇曦;中药砷剂有望成治脑胶质瘤新药[N];中国中医药报;2011年
8 实习生 吴菲 通讯员 张献怀;李安民:突破“脑禁区”[N];科技日报;2009年
9 ;C6细胞热休克蛋白抗原肽复合物的提纯及其抑瘤作用的研究[N];中国医药报;2003年
10 齐继成 译;新药物:来自动物毒液[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978