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同型半胱氨酸导致血管内皮功能损伤机理的实验研究

阮骊韬  
【摘要】: 高同型半胱氨酸血症(HHcy)被公认是一种导致动脉粥样硬化的独 立的危险因素,大约有40%的冠心病和脑血管动脉粥样硬化的患者存在 高同型半胱氨酸血症。但是,Hcy损伤血管壁、导致内皮功能损伤的机 理至今仍不完全清楚,有的实验甚至出现相反的结论。 目的:①、探讨HHcy导致内皮功能损伤时,兔血中NO、ET以及 GSH-PX、SOD活性的改变,从而观察氧化应激在活体内皮功能损伤中 的作用;②、研究抗氧化剂VitC对Hcy导致的兔血管内皮功能损伤是 否具有保护作用,并探讨其机理;③、利用透射电镜观察HHcy时,兔 髂外动脉血管内皮细胞、平滑肌细胞是否出现超微结构的改变;④、通 过培养的HUVEC,研究不同浓度的Hcy对内皮细胞分泌NO、ET的影 响;⑤、通过RT-PCR的方法,研究不同浓度的Hcy是否在转录水平对 HUVEC eNOS产生影响,通过以上的研究探讨Hcy导致内皮功能损伤 的机理。 材料和方法:①、实验一:将兔随机分为两组,每组9只,分别灌 服5.0g/kg体重的L-蛋氨酸(M组)和等量的自来水(N组),然后于4、 8、12、24小时检测其血浆中的NO、ET以及GSH-PX、SOD的活性, 同时利用高分辨力超声检测其EDD、EID,并利用透射电镜观察24小 时后兔髂外动脉超微结构的改变;②、实验二:将兔随机分为三组,每 组9只,分别喂食正常饲料(N组),L-蛋氨酸(0.8/kg体重.天)饲料(M 组),L-蛋氨酸+VitC(1.0/kg体重.天)饲料(MC组),然后于第20、40、 60、80天取血检测NO、ET和GSH-PX、SOD的活性,同时利用高分 辨力超声检测其EDD、EID,并利用透射电镜观察第80天后兔髂外动 脉超微结构的改变;③、实验三:收集HUVEC,然后进行细胞培养, 传至第三代后,将其与不同浓度的Hcy(生理浓度0.01mmol/L、病理生 一 理浓度 0、5 mmol几、非毒性药理浓度 2.0 mmol几、毒‘胜药理浓度 5.0 mmol几)共同培养 24小时,分别在 4、6、8、24小时检测培养液中 NO、 ET的含量,观测 HCy对u者的影响。24小时后,收集 HUVEC,提取 总的NA,然后利用人eNOS特异性引物进行逆转录,再将逆转录的 CDNA进行PCR扩增,最后通过凝胶电泳分析RTFCR的产物,从而探 * Hey对 eNOS fnRNA水平的影响。 结果:①、急性HH叮时,M组兔骼外动脉的EDD较对照组显著降 低,且呈明显的时间依赖性(0小时,!253土18*%4小时,!584凹!O%: 8小时,!.36凸81W12小时,-!56幻.!3%;24小时,357幻15%,p< 0.of);而曰D无明显的改变;②、急性 HHCy时,M组兔血浆中 NO 较对照组明显降低(对照组,248.52士27.56 u mol/L vs M组 0,]、时, 216!3土31二8卜mol儿;4,h时川05刃土16.57卜mol儿;8小时,!04.38土1003 u mo几:12’h时门门63幻964卜 Inol儿:24’h时,8302述889卜 mo!几, p<005),血浆ET却明显升高(对照组,168.47土37.52pg/Illl VS M组 0小时,18753t575!pyll:4’h时,262!31079!Pyl*l。8 ,hD, 38733幻5、25略M;12小时,45255幻2.84吟M:24小*,37026H372 p分川,p<00*,而血浆中 GSH干X和 SOD的活性与对照组之间无明 显差异:③、慢性 HCy时,MC组 (8天,349t 207%)和 M组旧0 天,926L273%)的 EDD均较对照组(80天,987L3门%)明显降低, p<co!,而且两组之间山差异明显,p<00!。与急性HH叮不同,慢性 HHcy的 MC组(80天,18.94t405%)和 M组(80天,1694t593%) 的*D亦较对照组旧0天,2773姐11%〕明显降低,p<005,但两者 之间无明显差异。④、慢性 HHCy时,M组(8天,209刊到.50if ffiol几) 血浆NO较对照组(386.27t3567 u mow)和MC组(80天,32755t22.57 u mow)均明显降低,p<0刀5,而 MC组和对照组之间无明显差异。 但是M组(80天,247.4肚26刀6pg/*l)和MC组(80天,289、1615522 2 一 p旮ml)血浆 ET却较对 组(19092f3430 p旮ml)明显升高,p<005, 而M组和*C组之间无明显差异;⑤、慢性HH cy时,M组、*C组 血浆 SOD活性均与对照组无明显差异,但 M组血浆 GSH-PX活性(80 天汀 12575L16.28活力单位)却较对照组(门662t2338活力单位)和 *C组旧0天,19033土25石4活力单位)明显降低,p<005,而*C组 和对照组之间无明显差异;③、EDD与血浆NO呈现明显的正相关(,064, p<0刀1),而与血浆*T呈现明显的负相关(,刀刀,p<OO!)二①、


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