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藻酸钙载体制备及复合软骨细胞修复关节软骨缺损的研究

刘松波  
【摘要】: 关节软骨损伤后有限的自身修复能力及其对人体功能的严重影响,使其成 为骨科基础和临床研究中的热点和难点课题。近十几年来,组织工程方法为软 骨修复提供了新的途径,并已取得了一定进展,但仍有很多问题亟待解决。本 课题就是根据这种需求,在软骨细胞培养的基础上,制备柱形藻酸钙载体并复 合兔关节软骨细胞进行体外培养、体内异位成软骨及修复兔膝关节软骨缺损的 实验研究,为软骨组织工程的进一步研究提供实验依据。 1.兔关节软骨细胞体外培养 目的:掌握细胞培养方法,观察兔关节软骨细胞体外生长情况,为组织 工程软骨的研究提供种子细胞和相关技术支持。方法:酶消化法分离幼兔关节 软骨细胞,进行原代及传代培养,观察细胞形态变化及体外生长增殖情况。结 果:原代细胞经培养3天后进入对数生长期,6代之内细胞形态及功能良好, 以3~5代细胞生长活力最为旺盛。未经传代连续培养3wk的细胞,形态趋向 于成纤维细胞,但胞外基质分泌明显,甲苯胺蓝染色阳性。结论:兔关节软骨 细胞增殖快,生长稳定,可作为软骨组织工程的种子细胞。 2.藻酸钙柱形载体的制备及复合细胞前后的结构观察 目的:制备新型细胞载体,为组织工程研究提供材料支持。方法:藻酸钠 溶液与葡萄糖酸钙溶液以不同比例混合均匀,置特殊模具中,经冷冻、脱水等 第四罕医大学博士学位 文 处圳获得杜形藻酸钙载体村料。以其复合兔片竹软忖驯胞,斤对衬本IV介汕胞 前后的结构进行纵织学和扫描电镜观察。结果:藻酸钙具何厂放0W网抢状g.‘巾J, 网眼呛上1!。"j见人小小等的微几,网!IR中IIJ吸咐·定贝JIu兔片u软刀邻fi地。f.’i 论:经初步观察,藻酸钙DZ形材料可试用作兔关曹软骨驯胞的8划个,Q介则胞 进行软骨组织_卜程的研究。 3.藻酸钙-软骨细胞复合物植入兔背肌成软骨的实验研究 R的:通过观察关节软骨纲胞复合干载体后莉下州叼J物休内刑)十卜]的州 及成软骨惰况,为组织丁程方法修复关节软骨缺损的研究捉供进 步的实验伙 排。方法:将藻酸钙载体复合兔关节软骨细胞,手术植入兔背剖汕KQ内,汁训 厂术后 ZWk、4Wb 时取材进行组织学观察。结果:软骨绷胞n{FjJ种动物f个内进 ·步’卜长增殖,4W卜卜1可见新生软骨织织形成。结论:藻酸例--软们哪!胞V介物 Illl‘异体动物休内形成软骨组织,可川厂软骨织织卜程的研4乙 4.藻酸钙载体复合软骨细胞修复兔关节软骨缺损 目的:观察藻酸钙-软骨细胞复合物在兔股骨滑车关节币i个层软竹缺损修 复中的作用。方法:新西兰白兔共26只,取其中以)只,】’骸股关V们股竹附 车面造成直径0.3cm的全厚层关节软骨缺损,人侧为藻酸钙复合软什圳胞川, 植入藻酸钙-软骨细胞细胞复合物,右侧为单纯藻酸钙纠,枪入<丫I藻刑叭5划A、 作为对照。另外6只,缺损处不加任何处理,作为标准宁门组。术们4wk、Hwk、 12Wb、24Wb、28Wb分别取材行组织学观察。结果:藻酸钙复合软骨绷胞纲形成 软骨组织修复:单纯藻酸钙组获得部分纤维性修复,完全空白织没行修复,缺 损底部方少V纤雏红织,医骁组


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