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幽门螺杆菌ureB基因的克隆、表达及其表达产物免疫活性的研究

秦立篷  
【摘要】: 幽门螺杆菌是重要的致病菌,感染约一半的人类人口。幽门螺杆菌最为重要的特征是含有极为丰富的尿素酶,此酶可将尿素迅速分解为氨和二氧化碳。尿素酶有很强的抗原性。据此特点,人们发展了依赖尿素酶的诊断方法,如快速尿素酶试验、呼气实验、血清学方法等。 幽门螺杆菌不易培养,要获得大量的Hp蛋白,需要进行重组表达。我们选择了尿素酶B亚基进行重组表达。 我们根据文献报道设计引物,应用PCR技术从临床分离株中扩增出ureB基因,克隆入大肠杆菌克隆载体pGEM-7zf(+),测序后经同源性比较,证实为ureB基因。进一步亚克隆到大肠杆菌表达载体pBV220进行诱导表达,蛋白电泳可见重组蛋白表达,分子量大小与预期一致,表达形式主要为包涵体。Western Blot实验表明重组蛋白有反应原性,离子交换色谱纯化后作为DIFGA的抗原检测从血站收集的血清,所得数据与文献报道近似,重复性良好。 第 四 军 医 大 学 硕士 学 位 论 文 因非融合表达的产物不易纯化,我们又将ureB基因亚克隆到大肠杆菌表达 载体pRSET什进行诱导表达。蛋白电泳可见重组蛋白表达,分子量大小与预期 一致,表达形式主要为包涵体。亲和色谱纯化后包被硝酸纤维素膜,用DIFGA 检测从血站收集的血清,所得数据与文献报道近似,重复性良好。 以上结果表明,重组克隆后表达幽门螺杆菌尿素酶B亚基可以与Hp感染者 血清中的抗UreB抗体反应(不受Hp异质性影响X 重组蛋白用作抗原以DIFGA方 法检测Hp感染是可行的。


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