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用分子组织工程学方法研究转化生长因子β_1对骨髓基质干细胞生物活性的影响

郑志宏  
【摘要】: 分子组织工程学是将分子生物学与组织工程学有机结合,运用分子生物学的理论和技术,从分子水平研究细胞、组织诱导因子、生物材料及其相互作用的关系,为研制能更有效地恢复、维持或改善病损组织或器官功能的生物替代物奠定基础。 本研究以骨髓基质干细胞(BMSCs)作为靶细胞,TGFβ_1基因片段作为目的基因,经LipofectAMINE转染目的基因与靶细胞中,观察BMSCs经基因转染后的生物学特性。探讨BMSCs作为基因治疗的靶细胞的可能性及BMSCs自身分泌的TGFβ_1对其生物学特性的影响。 实验方法:载体pcDNA3-TGFβ_1构建后,取新西兰兔骨髓,分离培养BMSCs,通过脂质体LipofectAMINEA介导pcDNA3-TGFβ_1基因和空载pcDNA3转染BMSCs。采用电泳检测pcDNA3-TGFβ_1构建是否成功;通过TGFβ_1免疫组化染色检测转染是否成功;运用形态学观察、透射电镜(TEM)、流式细胞仪(FCM)、碱性磷酸酶(ALP)染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法,观察转染后BMSCs增殖与分化情况。 实验结果:载体pcDNA3-TGFβ_1构建成功;TGFβ_1基因转染BMSCs成功,转染后BMSCs表达TGFβ_1至少能够持续4周;转染后的BMSCs增殖活性增强,经G_(418)稳定筛选后逐渐向软骨方向分化。对照组BMSCs转染后增殖活性较实验组低,没有向软骨细胞分化的趋势,经G_(418)筛选后1周左右全部死亡。 第四军医大学硕士论文 结论:骨髓来源的基质干细胞可以作为基因治疗的受体细胞;脂质体 载体转染骨髓基质干细胞能够成功,可以应用于今后的临床或实验研究工 作中;TGFA基因转染 BMSCS能够促进其增殖和分化活性;TGF P,基因转染 BMSCS能够诱导其向软骨方向分化;骨髓基质干细胞能够成为分于组织工程 化软骨的理想种子细胞。


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