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芍药甙促小鼠皮层神经元活性及存活的体外研究

吴玉梅  
【摘要】: 本课题主要通过体外细胞培养技术,观察了中药芍药的单体成份芍药甙(Paeoniflorin,PF)对神经细胞的作用,为探索其治疗中枢神经系统损伤的作用机理打下初步的实验基础。本实验主要分为三部分: 第一部分:体外PF对小鼠皮层神经元活性的影响。 采用体外神经细胞培养的方法,对胚胎小鼠(E_(15))大脑皮层的神经细胞进行有血清和无血清原代培养,以MTT法观察芍药甙(PF)对神经细胞活性的影响,并运用相差显微镜和免疫细胞化学技术对药物作用前后的细胞进行形态学观察。 结果表明:中药芍药的单体成分芍药甙可明显促进大脑皮层神经元的活性,并呈现一定的量效关系,PF促进神经元活性作用不依赖 m川军闷人学帧】十卅穴主毕业学h论上 一 于血清;且在 41石 mg·L‘浓度时,PF促进神经元活性的作用最强(与 对照组相比,P<0.OU。 第二部分:PF对体外培养大鼠呈形胶质细胞活性的作用。 本实验的目的是探讨PF 是否通过增强星形胶质细胞活性增加 PF 神经营养作用的可能性。采用呈形胶质细胞体外培养的方法,利 用新生SD大鼠(P。)大脑皮层星形胶质细胞进厅原代培养,7d后纯化, 传代后的胶质细胞分别进行有血清和无血清培养。以MTT法观察PF 对星形胶质细胞活性的影响,运用相差显微镜及免疫细胞化学的方法 对药物作用前后的胶质细胞进行形态学观察。 结果表明:(l)PF对圣形胶质细胞活性有明显的抑制作用,PF 不同浓度组呈形胶质细胞活性均低于对照组①<0刀1* 并呈现出一定 的量效关系。(2)PF对星形胶质细胞活性的抑制作用不依赖于血清。 第一、二部分推论:体外PF促进神经细胞活性的作用是一种直 接的作用,而不是通过胶质细胞间接影响神经细胞。 第三部分:芍药贰对下常及受损培养小鼠皮层神经元的保护作用。 将胚胎15d小鼠大脑皮层神经细胞以有血清方式分散接种于24 IL扳中,加入实验一确定的最佳促神经细胞活性的PF浓度。实验组 加入兴奋性毒剂海人藻酸(KAL 用台盼蓝染色,计数存活细胞,同 时运用相差显微镜及免疫细胞化学方法进行形态学观察。 结果表明:门)PF在20.8和41石 mg·L“’可延长药物作用组神 经细胞存活时间,且细胞死亡率低于不加药物组。()加入兴奋性氨 基酸KA 50 pmol·L”’作用 30 min,导致明显的神经元损伤,具体表 3 识W军卜人卜…卜,们L生毕业川)沦入 现为:神经元肿胀,夫去扒沦仕,核偏位,大量细胞死亡。预兀加入 PF 20.8和 41.6 mg工’‘培养 4 d,叮对抗 KA所致的宁经损伤。 结 论:PF可延长神经细胞存活时问及对抗*A所致的兴奋性 神经损伤。


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