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小鼠神经系统神经激肽B受体的研究

王红  
【摘要】: 一、神经激肽B受体(NK3)在小鼠中枢神经系统的定位分布及与加压素(VP)、CABA、阿片μ受体(MOR)的共存关系。 1、神经激肽B受体(NK3)在小鼠中枢神经系统的定位分布。应用免疫组织化学染色方法对小鼠中枢系统内NK3受体的分布进行了观察,结果表明:在小鼠中枢神经系统的绝大部分区域,NK3受体样免疫阳性产物位于胞体和树突上,少部分区域位于神经毡(neuropil)内。大量NK3受体样免疫反应阳性神经元出现于前嗅核、伏隔核、隔区、腹侧苍白球、苍白球、尾壳核、终纹床核、下丘脑前区、下丘脑结节区、下丘脑外侧区、穹隆周区、视上核、弓状核、乳头体、黑质、腹侧被盖区、红核后区、上丘和下丘、导水管周围灰质、孤束核、及延髓和脊髓背角浅层。在大脑皮质的浅层、梨状皮质、背侧海马、杏仁核、脑干网状结构等核团内也含有一定数量的阳性神经元。在丘脑的中线核团和板内核、腹侧海马和脚间核等处,NK3受体阳性免疫反应产物主要位于神经毡内。 2、神经激肽B受体(NK3)在室旁核和视上核与加压素(VP)的共存关系及高渗刺激下NK3受体阳性神经元表达FOS。在室旁核和视上核NK3受体与加压素共存于一部分细胞,室旁核中NK3受体免疫阳性反应产物不如视上核密集,且神经元数目以后者为多。在室旁核和视上核双标神经元占NK3 第四军医大学博士学位论文 阳性神经元总数的65%和42%,占加压素阳性神经元总数的60% 和39%。在高渗盐水刺激的条件下,室旁核中大部分N’K3受体样 阳性神经元可表达FOS。结论N’K3受体广泛分布于小鼠中枢神 经系统内提示它可能具有重要的生理功能。在室旁核和视上核存 在NK3受体与加压素的双标神经元,与水盐代谢有关的神经元在 高渗刺激下表达FOS,同时可以激活含NK3受体神经元,提示 NK3受体通过调节加压素释放参与水盐代谢和渗透压的调节。 3、小鼠脊髓内神经激肽B受体(*K3)与阿片卜受体 (MOR)和 GABA的共存关系。本实验目的在于阐明神经激 肽B受体(NK3)参与脊髓痛觉调制的机制。首先观察了小鼠脊髓 后角阿片。受体(MOR)和NK3受体的共存情况。激光共聚焦显 微观察表明:脊髓背角浅层*11层44%的N’K3受体样神经元呈MOR 样阳性,而MOR样阳性细胞总数的93%神经元呈N’K3受体样阳性。 其次,在MOfuN’wx双重标记神经元和NOS样阳性神经元中进行免 疫荧光三重标记实验,结果显示有37%的NK3受体样阳性神经元呈 NOS免疫阳性,占后角浅层NOS样免疫阳性神经元总数的82%。 没有发现三重标记的神经元。大量N’K3受体样神经元呈GABA阳 性,但未见NK3/GABA双标神经元含MOR。约有43%的NK3受 体样阳性神经元含GABA,占GABA阳性神经元总数的7%,观察 了做H重标记的61个MOR阳性神经元,只有2个呈GABA阳性。 结果提示在脊髓后角浅层的N’K3受体神经元中存在两种细胞亚群, 而且N’K3受体参与脊髓痛觉信息调制的机制可能与阿片肽和一氧 化氮(NO)两种途径的调节有关。 二、小鼠消化道神经激肽B受体(NK3)的定位研究及共 头国家自然科学基金荧助项目(39600045,39970377,39870109)5 第四军医大学博士学位论文 存关系。本实验采用免疫组织化学ABC染色和兔疫荧光组织化学 染色方法观察了神经激肽B受体(NK3)在小鼠消化道的分布及其 与 NOS(nitric oxide synthase)、CR(Calretimn)和 PV(Pavelbumin) 等神经递质或调质的共存关系。结果表明NK3受体样阳性的神经元 胞体及神经纤维主要分布在十二指肠和空、回肠及结肠的粘膜下层 神经丛和肌间神经丛,食管和胃、直肠的神经丛未见NK3受体样阳 性产物;NK3受体样阳性产物大部分局限于神经细胞表面,在胞质 和一些轴突内部也存在,在胞质中染色较细胞表面浅。统计结果表 明NK3 受体样兔疫阳性神经元约占肠神经系统神经元总数的 0.5%一1%。小鼠肠铺片肌间神经丛内NK3受体与NOS、CR、PV等 神经递质均有不同比例的共存,此结果提示小鼠消化道内NK3受体 样阳性神经元可能参于消化功能的调节。大部分N’K3受体样阳性神 经元呈 Dogiel 11型神经元形态,且与主要是 Dogiel 11型神经元形态、 内源性感觉神经元为主的CR阳性神经元呈双重标记,椎测小鼠肠 铺片肌间神经丛内N’K3受体神经元是内源性感觉神经元,但少部分 (N’K3/NOS)可能是抑制性中间神经元,加上以往的功能上和机能 学证据都提示此受体存在于胆硷能神经元上,与小鼠肠道的收缩和 舒张有关。 三、小鼠周围器官神经激肽B受体的分布。免疫组织化学实 验结果表明:在所取组织中有多种组织均呈NK3受体样兔疫反应阳 性,阳性产物位于细胞质内,其表达程度由强到弱依次为:胰脏、 肺、心脏、胃和小肠:呈较高表达的组织有:胰脏、肺、心脏、晕 丸;呈中等程度表达的有:胃、小肠;呈低表达或无表达的有;肝 脏、肾脏,在胆囊和胸腺无表达,兔疫组化染色结果特异性较好, A国家自然科学基全资助项目(39600045,39970377,39870109)6 第四军医大学博士学位论文 背景


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