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EDA在牙胚中的表达及其对人牙乳头间充质细胞的作用

甘云娜  
【摘要】: 先天性外胚层发育不全无汗综合症(Hypohidrotic Ectodermal Dysplasia, HED)是以毛发稀少(hypotrichosis)、汗腺缺失(hypohidrosis)、全部或部分牙齿缺失(anadontia/hypodontia)为主要临床特征的一类先天性遗传性疾病。该疾病主要有3种遗传方式:X染色体隐性遗传(XLHED)、常染色体显性遗传(ADHED)以及常染色体隐性遗传(ARHED)。其中以XLHED最为常见。 XLHED的致病基因EDA基因已于1996年由Kere J.克隆成功。此后的研究表明EDA基因编码的蛋白为TNF配体家族成员。有研究表明EDA基因在小鼠的口腔上皮以及帽状期牙胚的外釉上皮中表达,EDA基因的突变可引起釉结节的发育异常,推测EDA基因在调控小鼠牙齿的形态发育中占有重要作用。 但是,目前尚没有关于EDA基因在人牙胚组织和细胞中具体作用的研究。 本文主要通过制备EDA蛋白的多克隆抗体,借助免疫组织化学、细胞免疫荧光染色等方法对EDA蛋白在人和小鼠牙胚组织和人牙乳头间充质细胞中的表达,及其过表达对人牙乳头间充质细胞一般生物学特性及EGFR表达的影响进行了研究,以探索EDA在牙胚发育中的作用。 我们成功地构建了EDA基因的原核表达载体,并使其在大肠杆菌体内获得高效表达。将获得的目的蛋白免疫兔子可以产生高效价的多克隆抗体,为检测EDA蛋白在各种待测组织和细胞中的表达奠定了基础。 用制备的抗体对人和小鼠牙胚组织作免疫组化研究,结果表明各个时期人和小鼠牙胚组织中均不能检测到EDA蛋白的表达。但可在颌面部的表皮、腺体、软骨中检测到EDA蛋白的表达。体外培养的人牙乳头间充质细胞则有EDA蛋白的弱表达。 I 第四军医大学博士学位论文 我们还成功的构建了EDA基因的真核表达载体,并筛选出稳定转染 EDA基因的人牙乳头间充质细胞,相关的研究表明EDA蛋白的过表达可以 抑制人牙乳头间充质细胞的生长和碱性磷酸酶的活性,并促进其EGFR的表 _达。


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