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壳聚糖多孔膜的制备及其作为生物因子盖髓载体的初步研究

苏丽萍  
【摘要】: 目前临床上常用的盖髓剂为氢氧化钙,它可诱导第三期牙本质形成,有一定的临床疗效,但用于直接盖髓存在一些缺点,如可造成牙髓表面的凝固性坏死等。研究表明生物因子如TGF-β_1,IGF-Ⅰ、Ⅱ等与牙胚发育和牙髓损伤后修复关系密切。然而外源性生物因子用于临床还存在一些问题,如合适的载体、剂量反应、半衰期、免疫原性等。本研究以壳聚糖为原料,制备厚度及孔隙率适宜的多孔膜,并初步探讨其作为生物因子盖髓载体的可行性。 实验方法:(1)利用冷冻诱导相分离(cryogenic induced phase separation CIPS)的方法分别在-5℃和-20℃制备两种不同的壳聚糖多孔膜,利用扫描电镜观察两者的微观形态特征,并对两者孔隙率及在0.01M磷酸盐缓冲液(PBS)中30天的体外降解率进行比较。(2)L929细胞与壳聚糖多孔膜复合培养,进行扫描电镜观察;动物实验观察材料的生物相容性。(3)预实验将复合10ng/ml TGF-β_1的壳聚糖多孔膜进行狗牙直接盖髓,观察盖髓3周后牙髓的修复情况。根据预实验结果将复合不同浓度TGF-β_1的壳聚糖多孔膜进行狗牙直接盖髓。 实验结果:(1)两种膜均为不对称结构,一侧为多孔层,一侧为致密层。-5℃制备的膜多孔层的孔径在50—100微米之间,结构比较均匀,孔隙率93.2%,降解率25.2%;-20℃制备的膜多孔层的孔径在100-400微米之间,结构不均匀,孔隙率78.2%(p<0.01),降解率19.5%(p<0.05);(2)L929细胞可深入孔 第四军医大学硕士学位论文 隙内部并以球形状态粘附于材料表面,生长曲线表明细胞在材料 中生长良好;狗牙直接盖髓2周后的组织切片表明牙越无明显的 炎症反应,未出现坏死层。(3)复合10ng/ml TGF一p;的壳聚糖多 孔膜用于狗牙直接盖髓3周后穿做孔处未观察到修复情况,而在 未穿髓处可观察到少量第三期牙本质形成。 结论:本实验初步探索了壳聚糖多孔膜用作外源性生物因子 盖髓的可行性。一5℃制备的壳聚糖多孔膜结构均匀、孔径适宜、 孔隙率高,可均匀地吸附外源性生物因子,并能起到良好的细胞 支架作用,具有良好的生物相容性,适合作为外源性生物因子载 体应用于活随保存。预实验中复合10ng/ml TGF一pl的壳聚糖多 孔膜用于狗牙直接盖髓3周后在未穿髓区域可观察到少量第三期 牙本质的形成。


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