收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高温对体外培养神经元生物学特性的影响

郭以川  
【摘要】: 高温环境下,当人体维持热平衡的汗液蒸发降温超过环境中的最大蒸发量时,体内热量蓄积,下丘脑调节热蓄积和热消散平衡失败,人体的热平衡被破坏,体核温度持续升高,常导致中暑高热、虚脱,出现头痛、惊厥、昏迷等症状。其损伤过程、损伤机制、治疗策略和方法等,一直为人们所关注,希望通过对这些问题的深入探讨,能进一步解决热射病的预防、治疗、康复等诸多问题,对其引起的热应激反应的研究,将具有重要的卫生学及预防医学意义。 从低等动物细菌到高等动物人类,受高温作用后均可发生热应激反应,此反应的特点是选择性合成一组多肽——热应激蛋白,它是一种保护机体的蛋白。众所周知,人对热可产生适应,热适应后可缓解其引起的生理紧张,提高耐热能力,但热适应又是有一定限度的,超过限度后可出现热损伤,故研究热引起的机体生理、生化反应,探索热应激过程中热应激蛋白的作用在科研及临床上具有积极的意义。热应激反应的结果是高温下热应激蛋白的合成增加,组织细胞出现坏死、凋亡及一系列的形态学及分子水平改变,热应激蛋白合成增加反过来又对热应激反应的损伤性结果具有保护作用。在热应激损伤的过程中,受损神经元内出现一系列亚细胞和分子水平的病理变化,造成细胞膜、细胞器和DNA损伤,其中DNA损伤可能既是多种致伤因素作用的结果,也是细胞内产生新的变化和损伤的原因,研究表明DNA损伤引起的细胞凋亡在热应激损伤的病理过程中占有十分重要的作用,是热应激损伤引起凋亡的主要原因之一。神经元凋亡是一种可调控的细胞死亡方式,受到一系列蛋白质的调控。因此详细了解热应激损伤的细胞的生物学特性的改变及 第四军医大学硕士学位论文 凋亡情况,可以为防止神经元凋亡,寻找热应激损伤的保护性方法和技 术提供有益的思路。目前的研究表明高温可导致多种细胞凋亡,而在体 外培养的神经元上,这方面的报道较少。本研究旨在建立体外培养神经 元高温损伤模型的基础上,探讨高温损伤后神经元的形态、凋亡及细胞 活力等生物学改变,并初步探讨预热对体外培养神经元的保护作用,希 望能为高温损伤的机制及治疗做一些有益的基础工作。 本实验在我室首先建立了小鼠大脑皮质神经元高温损伤模型,在此 基础上,将培养的皮质神经元分为未经高温处理的对照组、高温处理的 实验组,采用倒置显徽镜、1刃E染色方法、DNA聚合酶一I(eno、v大片 段介导的生物素标记的山订P末端标记方法(租eno、v法)等方法,观察 对照组及处理组各温度下损伤的神经元的形态学变化,检测DNA断裂 损伤情况。本次实验所得结果如下: [l]光镜观察:在倒置显微镜下,正常神经细胞经胰蛋白酶消化后 呈圆形。接种培养后10h,胞体增大呈圆形或椭圆形,分散的神经细胞 开始贴壁。1 6h贴壁细胞增多并有突起长出,胞体呈梭形或三角形,双 突起多见,突起末端可见生长锥。24h后大部分神经细胞贴壁,突起延 长,开始相互连接。3天后细胞胞体进一步增大,突起继续增长,相互 连接成神经网络。7天时对照组细胞光晕明显,胞体饱满并聚集成团, 细胞团间有粗大的突起并相互连接,神经网络稠密。处理组高温后漂浮 细胞增加,神经细胞数目减少,神经网络稀疏,有的细胞突起漂浮,有 的失去突起,呈圆形或椭圆形。这种形态改变温度越高越明显。39℃时 部分细胞坏死,胞体碎裂。42℃大部分细胞出现坏死,胞体碎裂,突起 漂浮或消失。 [2] HE染色显示:光镜下观察,细胞质呈淡红色,细胞核呈淡蓝紫 色。未经高温处理组神经元形态正常,胞核清晰可见,高温处理后部分 细胞出现形态变化,胞体皱缩或肿胀,随着处理温度的增高,神经元胞 体变小,胞质浓缩,核染色质凝集,突起变短,变细,42℃高温处理后 细胞数量明显减少。 [3刃~法检测显示:未经高温处理的对照组神经元经习enow 法检测的结果为69.54士1 .70,39℃时达高峰133.40士4.49,而后又逐渐 第四军医大学硕士学位论文 降低。经过方差分析,不同温度平均灰度不同(p0.01),各组与对照组 比较有差异。未经预热处理的对照组神经元37℃经犯enow法检测的结 果为70.16士0.91,39℃时达高峰133.“士4.41,而后又逐渐降低。实验 组神经元平均灰度值明显较对照组为低,其最高峰值为1 10.86士2.94。 经过方差分析,不同温度点平均灰度不同(卜0.01),各组与对照组比较 有差异。 [41 MTr比色法的结果:未经高温处理的对照组神经元经州叮T比 色法检测的吸光度为0.48士0.似随着温度的增高,检测的细胞吸光度明 显降低,在42℃时达最低,为0.21士0,02。 本次实验结论如下: 【11本实验培养了小鼠原代的皮质神经元,应用台盼蓝对细胞的活性 进行评估,经光镜、HE染色发现经高温处理后的神经元存在明显的形 态改变。 [2]根据DNA聚合酶I大片段的功能和原位杂交的原理,首次用 粗enow法在高温处理后的神经元上证明了凋亡的存在,其凋亡高峰在 39℃,达到峰值的幻enow阳性细胞中多数可能为DNA单链断裂的细


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李敏;细胞因子与热应激和热适应[J];中华劳动卫生职业病杂志;1998年02期
2 王丽娜,张伟华,李全凤,徐长庆;热应激预适应对H_2O_2诱发乳鼠心肌细胞损伤的保护作用[J];哈尔滨医科大学学报;2003年01期
3 钱令嘉,程素琦,吴孟平,陈西京,张林;热应激大白鼠心肌钙调素含量与钙代谢的研究[J];中华劳动卫生职业病杂志;1995年01期
4 赵亚丽,邢成,吕志忠,王鲁明,李建栋,赵永岐;热应激对大鼠纹状体多巴胺介导的磷脂酰肌醇信号系统的影响[J];航天医学与医学工程;2001年02期
5 宋学立,钱令嘉,李凤芝,弓景波;bcl-2基因转染对热应激心肌细胞保护作用的机制探讨[J];中国应用生理学杂志;2002年04期
6 周爱军,罗海吉;热应激对胸腺的损伤及精氨酸的保护作用[J];国外医学.卫生学分册;2004年06期
7 吴建明,吴包金,林子豪,倪灿荣,刘麒;热应激预处理加强皮瓣组织存活的作用及其与HSP_(70)合成的关系[J];第二军医大学学报;2005年01期
8 汤平涛,王瑞波,吴广林,贺涵贞,张国高;热应激大鼠肝线粒体,微粒体脂质过氧化与 Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP 酶的变化[J];中国药理学与毒理学杂志;1997年02期
9 钱令嘉,程素琦,吴孟平,陈西京;热应激大鼠心肌钙代谢的变化及其机理探索[J];中国应用生理学杂志;1998年02期
10 李敏,赵法伋,郭俊生,李正银;“生脉饮”对热应激大鼠血浆锌、铜、铁等微量元素含量的影响[J];卫生研究;2000年01期
11 冷雪,弓景波,吴淑庆,胥达,王新兴,钱令嘉;中药复方对热应激大鼠的抗热效果[J];解放军预防医学杂志;2004年05期
12 罗海吉,邱仞之,何志谦;高温对小鼠血清游离氨基酸的影响[J];营养学报;1995年01期
13 陈晓萍,虞学军,常绍勇,费锦学;模拟微重力对热应激时人血浆中单胺类递质含量的影响[J];中国应用生理学杂志;2001年02期
14 孔小燕,张连元;热应激预适应和心肌的延迟保护功能[J];山东医药;2005年06期
15 李亚洁,张立颖,王秀岚;热应激评估标准、物理降温技术与装置的研究进展[J];护理研究;2002年03期
16 陶卫国,傅向阳;热应激对心肌缺血耐受性影响的机制[J];心脏杂志;2004年04期
17 罗海吉;杨真;曾静;卢晓翠;孔亮;;补充L-精氨酸对热应激小鼠血清NO、NOS和T细胞亚群的影响[J];营养学报;2006年04期
18 冯建江;刘兵;;热适应对热应激肝癌细胞周期影响[J];中国公共卫生;2006年12期
19 卢艳梅;;热应激与运动条件下热休克蛋白70的表达[J];科技信息;2010年14期
20 唐文春,王葆芳,徐晓波,刘广超,段永建;山莨菪碱对大鼠热应激的影响[J];中华劳动卫生职业病杂志;2002年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 余冰;张克英;陈代文;;AMPK在仔猪体内的分布及热应激对AMPK活性的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
2 张锦辉;李中文;贾志君;胡茂颖;林新;陈忠;;产前热应激对仔鼠生殖腺GABA受体发育的影响[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年
3 徐向东;程兴仁;滕金山;;热应激与个人防护[A];第二届全国人—机—环境系统工程学术会议论文集[C];1995年
4 尹小平;袁慧;张明;;奶牛热应激及对免疫影响的研究进展[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年
5 褚耀诚;刘凤华;许剑琴;;清凉冲剂对不同环境温度下猪血清中NO含量的影响[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
6 张凡建;王金秋;岳圆;侯引绪;王九峰;;日粮添加有机铬对中度热应激奶牛生理生化指标的影响研究[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
7 张书霞;华荣虹;鲍恩东;;热应激对鸡免疫器官细胞凋亡的影响及其调节机理[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分第12次暨中国动物病理生理学专业委员会第11次学术讨论会论文集[C];2003年
8 王胜林;方智;;猪的热应激及营养调控的研究进展[A];猪营养与饲料研究进展——第四届全国猪营养学术研讨会论文集[C];2003年
9 冯英;田真;高继伟;曹凯军;何志清;;奶牛热应激与牛舍的设计和建造[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
10 王建平;;热应激奶牛瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌的含量[A];《第六届中国牛业发展大会》论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王立志;热应激对奶牛、奶山羊体内内毒素含量的影响及缓解热应激的营养技术研究[D];四川农业大学;2010年
2 韩爱云;热应激对肉鸡淋巴细胞钙信号转导的影响及铬的调控作用[D];中国农业科学院;2010年
3 李守军;肉鸡急性热应激损伤及其机理的研究[D];中国农业大学;2005年
4 李静;37℃持续热应激对肉鸡血流动力学和酸碱平衡的影响[D];中国农业大学;2004年
5 张大江;经导管肝动脉热碘油栓塞治疗原发性肝癌机理研究[D];复旦大学;2003年
6 杜立银;热应激对小鼠附植前早期胚胎发育影响的研究[D];东北农业大学;2005年
7 李守军;热休克对牛卵母细胞和IVP胚胎影响的研究[D];东北农业大学;2001年
8 朱家桥;DNA甲基化在多囊卵巢综合征和热应激中的变化及作用[D];甘肃农业大学;2008年
9 陶秀萍;不同温湿风条件对肉鸡应激敏感生理生化指标影响的研究[D];中国农业科学院;2003年
10 蔡亚非;奶牛热应激的细胞免疫调控及其分子机理研究[D];南京农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭以川;高温对体外培养神经元生物学特性的影响[D];第四军医大学;2004年
2 李峰;热应激对轴索损伤保护机制的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
3 龚远英;肉鸡急性热应激损伤与应激损伤机理的研究[D];南京农业大学;2001年
4 付旭彬;肉鸡急性热应激损伤及其机理的研究[D];南京农业大学;2002年
5 孙永建;热应激预适应后HSP70的表达及其对大鼠肢体缺血再灌注损伤的影响[D];第一军医大学;2002年
6 张根军;生长猪热应激反应模型及适宜监测指标筛选[D];中国农业科学院;2004年
7 罗晓凤;热应激对血管内皮细胞增殖的影响及CASK增殖信号通路的研究[D];第三军医大学;2002年
8 蒋定文;胸腺基质细胞对热应激小鼠胸腺细胞调节作用的研究[D];第一军医大学;2000年
9 白兆鹏;硫辛酸对热应激下产蛋鸡生产性能及抗氧化能力的研究[D];东北农业大学;2004年
10 李俊杰;热应激对种公牛精液品质的影响及机理研究[D];河北农业大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 晨疆;夏季须防猪热应激[N];福建科技报;2004年
2 李崇婕;缓解家禽热应激的措施[N];中国畜牧水产报;2001年
3 山东省东平县 李巧云;减轻鸡热应激的饲料添加剂[N];河北农民报;2005年
4 冯雪;肉鸡热应激的缓解措施[N];陕西科技报;2009年
5 郑州牧专教授 朱士仁;夏季养鹅要防热应激[N];河南科技报;2006年
6 胡财旺;猪热应激导致营养不良的诊治[N];江苏农业科技报;2009年
7 山西恒丰强动物药业有限公司技术部 屈仁健;夏季猪热应激防治小结[N];中国畜牧兽医报;2007年
8 天福莱技术部;夏季需防产蛋鸡热应激[N];中国畜牧报;2004年
9 梁占学 吴国清 程志学;蛋鸡热应激的饲养管理[N];中国畜牧兽医报;2009年
10 侯增海 郭焕新;热应激对母猪的影响及应对措施[N];中国畜牧报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978