收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人与小鼠神经干细胞生物学特性的比较研究

姬西团  
【摘要】:神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是具有趋向性、自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。应用NSCs特性,治疗神经系统多种疾病具有广泛的前景,尤其在神经退行性疾病、缺血性疾病的功能替代以及作为基因载体治疗胶质瘤等方面更是如此。到目前为止,NSCs的一些特性仍然不清。有学者认为NSCs分化与细胞的内环境、神经营养因子、分化因子、细胞的信号转导等有关。然而,由于不同来源的NSCs对同一分化因子反应各异,同一来源的NSCs对不同分化因子或不同浓度亦反应不同,致使这一研究结果莫衷一是。另外,克隆球内及其之间能否形成突触联系,以及细胞连接等信息传递的形态学结构,目前尚未见到有关报道。为此,本研究将分为四大部分对NSCs的生物学特性进一步进行研究与探讨。 实验一 人、鼠神经干细胞体外培养及鉴定 (1)人NSCs的培养及鉴定迅速取出10~14w人胚胎脑海马区组织,将其置入无血清的DMEM培养液中初步处理后,用含人源性表皮生长因子(Human epidermal growth factor,HuEGF)、碱性成纤维生长因子(Fibroblast growth factor,basic fragment,bFGF),改良的Eagle DMEM培养基(Dulbecco Eagle’s minimum essential medium DMEM/F_(12))中进行培养。脑海马区组织富含有干细胞特性的细胞,该细胞在无血清的条件培养基中能持续增殖,并有形成细胞克隆的能力。随后借用免疫组织化学的方法对所培养的细胞进行鉴定,结果证明,经过数天培养的原代细胞巢蛋白(nestin)抗原呈阳性反应。培养细胞团在含血清的培养基中经诱导分化后,成熟分化为神经细胞,部分呈神经丝-200(Neurofilament-200,NF-200)抗原阳性,部分呈胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary 第四军医大学博士学位论文 acidicProtein,GFAP)抗原阳性。说明原代培养细胞在血清中能分化为神经元 及神经胶质细胞。这些均证明所培养的细胞系NSCs。 (2)小鼠NSCs的培养与鉴定在无菌条件下剖腹取胎鼠,胎头放入无血清 DMEM培养基的培养皿中。随后分离胎鼠大脑皮质,用含鼠源性表皮生长因子 (叩idermal盯ov沈h factor from mouse,EGF)及碱性成纤维生长因子(bFGF)的 DMEM条件培养基进行培养。由于胚小鼠脑皮层中可以分离出有干细胞特性的 细胞,该细胞在无血清的条件培养基中能持续增殖,并有形成细胞克隆的能力。 随后借用免疫组织化学的方法对所培养的细胞进行鉴定。这些原代培养细胞 nestin抗原呈阳性。在含血清的培养基中,这些细胞能分化为成熟的神经细胞。 分化细胞中部分呈NF一200抗原阳性,部分呈GEAP抗原阳性。说明原代培养细 胞在血清中能分化为神经元及神经胶质细胞。这些均证明所培养的细胞系NSCs。 实验二外来信号对神经干细胞定向分化的调控 目前的研究认为,决定NSCS定向分化的机制有两种:一种是细胞自身基因 调控,另一种是外来信号调控。本实验通过改变NSCs培养条件,观察其对NSCs 定向分化的影响。结果显示:(l)单纯用含表皮生长因子(EGF)的DM卫M培 养液培养NSCs,小鼠NSCs生长良好,在加血清诱导分化后,则主要为星形胶 质细胞,仅有个别的神经元。而人胚胎NSCs除克隆球较小鼠的形成慢且较松散 外,其余基本相同。(2)用含碱性成纤维生长因子伪FGF)的DMEM培养液培 养NSCs,小鼠与人NSCs均生长良好。然而,在加血清诱导分化后,不同浓度 的bFGF培养的Nscs其分化的细胞不同。当浓度为1 ong/ml时,分化细胞以神 经元为主。而当bFGF浓度为加n岁ml时,分化为胶质细胞的比例明显增加,同 时神经元明显减少。(3)用同时含碱性成纤维生长因子伪FGF)与表皮生长因 子(EGF)的DMEM培养液培养NSCs,小鼠与人NSCs生长及神经球的形成良 好。在加血清诱导分化后,含两种促进NSCs分裂因子培养的NSCs其分化的细 胞更接近体内NSCs分化的比例,其神经元约为35%,胶质细胞约为55%,其余 为小星形胶质细胞。当两种因子浓度同时增加或减少时(10ng/ml~20ng/Inl), 分化细胞的比例无明显变化。(4)神经生长因子(nery。脚认吐伪etor,NoF)对Nses 的影响。研究结果表明,NGF对神经球的形成无明显的影响,但可促使其向神 经元分化。(5)维甲酸(retinoic aeid,RA)对NSCs分化的影响,RA可能在神 第四军医大学博士学位论文 经再生和功能重建方面发挥重要作用。本实验对体外培养NSCs加入RA,观察 对NSCs的定向分化影响。结果见神经克隆球形成缓慢且较少,而直接分化为神 经元的细胞比例明显增加。这将为神经细胞脑内移植提供充足和理想的材料。(6) 分别用条件培养基(同时含EGF与bFGF的DMEM培养液)及IOmLL一, 20mLL一l、30mLL一’、40mLL一‘、somLL一’、100mLL一’胎牛血清+条件培养基, 对人胚海马区及小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,用免疫组织化学鉴定。随后对 不同培养条件下、不同生长时期NSCs生物学特性进行光镜观察。结果显示, 1 omLL一’、20mLL·L一‘胎牛血清+条件培养基组培养的Nscs比单独条件培养基 组克隆球多而大。30mLL一,、40mL.L一’、50mLL一’组既有部分贴壁细胞,也有大 量的克隆球形成,克隆球有伪足样突起,克


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郑学胜,朱晓峰;抗体封闭膜受体方法在神经干细胞研究中的应用[J];黑龙江医药科学;2002年05期
2 谷海刚,龙大宏,冷水龙;新生鼠基底前脑神经干细胞的分离和培养[J];解剖学研究;2003年02期
3 祝胜;神经干细胞在脑外伤中的治疗前景[J];现代诊断与治疗;2003年01期
4 张卿,左萍萍;神经干细胞诱导分化的研究进展[J];中国康复理论与实践;2003年07期
5 何扬东,曾进胜;脑缺血后内源性神经干细胞活化的研究进展[J];中国脑血管病杂志;2004年05期
6 赵宇,吕刚;神经干细胞与脊髓损伤的修复研究现状与展望[J];解剖科学进展;2005年01期
7 周向阳,邓永文,方芳,伍军,李茗初,高峻玮,柳浩然,方加胜;星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究(英文)[J];中国医学工程;2005年03期
8 张全斌,黄强,兰青;脑肿瘤干细胞的热点问题及研究进展[J];中华医学杂志;2005年26期
9 ;神经干细胞能修复受损脊髓[J];生命世界;2005年11期
10 徐南飞;;干细胞在神经系统疾病治疗中的应用[J];神经疾病与精神卫生;2007年05期
11 牟科杰;刘艳辉;;神经干细胞和肿瘤干细胞在胶质瘤病因研究中的进展[J];华西医学;2009年02期
12 刘楠;侯玲玲;曹贵方;关伟军;马月辉;;Aβ_(1-42)对神经干细胞的增殖和分化的影响[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2010年03期
13 ;外源性信号调控神经干细胞的增殖与分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
14 刘仕勇,杨辉;神经干细胞和祖细胞[J];细胞生物学杂志;2000年04期
15 董艳,朱诚,江基尧;成年哺乳动物中枢神经系统干细胞[J];生理科学进展;2001年02期
16 林绿标,章翔,吴景文,李侠,费舟,刘先珍,梁景文;小鼠神经干细胞中一氧化氮合酶的表达[J];第四军医大学学报;2002年23期
17 廖可立 ,姜晓丹 ,王彦惠 ,徐如祥 ,邹雨汐;SD大鼠神经干细胞培养鉴定实验研究[J];解放军医学杂志;2002年11期
18 程映华,梁晶,王晓冬,张沛云,郑祖根,顾晓松;壳聚糖与神经干细胞生物相容性的研究[J];苏州大学学报(医学版);2002年05期
19 田玲;;蛋白可促使神经干细胞移动[J];国外医学情报;2002年09期
20 卞林,惠国桢;决定神经干细胞分化的内外因素[J];江苏医药;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙一睿;胡锦;王尔松;奚才华;姚海军;;单层黏附培养技术在哺乳动物神经干细胞体外稳定增殖和多向分化中的应用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
2 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
3 田东萍;苏敏;吴贤英;张舸;;硒、B-27在神经干细胞球存活与分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
4 杨华静;徐鹏;张苏明;;低浓度β-淀粉样蛋白对神经干细胞的作用机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
5 文玉军;王登科;孙征;刘海洋;张莲香;秦毅;;成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
6 张波;王任直;;脑梗死后神经干细胞原位增殖及其机理的实验研究[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
7 邢雪松;吕威力;;Wnt-1在大鼠脑缺血再灌注海马组织内源性神经干细胞早期增殖分化中的作用[A];创新沈阳文集(B)[C];2009年
8 朱慧;李晓红;戚菁;施维;吴信华;陆玉华;鞠少卿;刘炎;;Pax3负性调控神经干细胞分化过程中胶质纤维酸性蛋白的表达[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
9 李革飞;李剑平;;应用流式细胞术检测神经干细胞表面标志物-Nestin[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
10 姚立松;刘天庆;葛丹;崔占峰;马学虎;;海藻酸钙微胶珠培养神经干细胞[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑敏;神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
2 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
3 李巍;神经干细胞的分化调控及BDNF基因修饰后对大鼠脊髓损伤修复的研究[D];第三军医大学;2002年
4 张力;人胚神经干细胞及骨髓基质细胞移植治疗帕金森病恒河猴模型的实验研究[D];复旦大学;2003年
5 戴宜武;骨髓基质细胞定向分化为神经干细胞及自体移植治疗中脑损伤研究[D];第一军医大学;2002年
6 张所军;神经干细胞向胶质瘤干细胞迁移及对其生长特性的影响[D];华中科技大学;2011年
7 张在金;神经干细胞移植治疗大鼠脑创伤的实验研究[D];第二军医大学;2005年
8 尹丰;人视网膜色素上皮细胞治疗帕金森病的实验与临床研究[D];第二军医大学;2006年
9 谭太贵;多通道PLGA脊髓再生介导管道治疗大鼠脊髓半横断损伤[D];天津医科大学;2006年
10 高国一;胎鼠脑神经干细胞鉴定纯化与生物学特性观察[D];第二军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯年花;人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的实验研究[D];南昌大学;2010年
2 宋精梅;比较新生大鼠脑部不同部位的神经干细胞被诱导分化为少突胶质细胞的差异[D];福建医科大学;2010年
3 李政;内皮祖细胞调控神经干细胞分化及其机制研究[D];第三军医大学;2010年
4 王念;绞股蓝皂苷对脊髓源神经干细胞体外培养的影响[D];陕西师范大学;2011年
5 刘朋;海藻酸钙/明胶微胶珠的制备及在神经干细胞培养中的应用[D];大连理工大学;2011年
6 郭兵;大鼠羊膜上皮细胞体外向类神经干细胞诱导分化及其移植后对视神经再生的作用[D];第二军医大学;2010年
7 吴珲;神经干细胞玻璃化冻存及其生物学特性的研究[D];大连理工大学;2011年
8 王培福;大鼠神经干细胞的培养和鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
9 刘孟宇;胶质瘤细胞条件培养基对神经干细胞迁移的影响[D];苏州大学;2010年
10 朱爱萍;重复经颅磁刺激对帕金森病模型小鼠体内神经干细胞增殖的影响[D];河北医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
2 时仲省 高思敏;移植神经干细胞 瘫痪兔子可爬行[N];大众卫生报;2001年
3 王成应;能克隆的神经干细胞被分离[N];健康报;2004年
4 刘海英;脑癌源于脑下室区的神经干细胞[N];科技日报;2009年
5 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
6 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
7 刘霞;美将成人皮肤细胞变成神经干细胞[N];科技日报;2011年
8 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
9 记者 吴苡婷;为脑损伤患者治疗打开希望之门[N];上海科技报;2009年
10 刘霞;美培育出能自我更新的神经干细胞[N];科技日报;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978