FK506预处理对内毒素休克小鼠及重症急性胰腺炎大鼠的保护作用

【摘要】：临床实践中发现，FK506可显著减轻移植器官的缺血／再灌注损伤。目前对缺血／再灌注损伤本质的认识是一非特异性炎症反应，单纯以FK506的免疫抑制机制并不能合理解释这一作用。近年的研究发现：红霉素、柔红霉素等大环内酯类药物可通过作用于NF-κB，抑制TNF-α、IL-1、IL-6等炎性介质产生而发挥抗炎作用，减轻由于炎症介质过度表达造成的组织损伤。FK506是否亦具有抗炎作用，其机理是否与抑制致炎因子的生成有关，国内外相关报道甚少。 内毒素休克和重症急性胰腺炎均可引起多器官的损害，其实质是炎症的级联放大过程，包括炎性介质的大量释放及炎症细胞的广泛浸润，可作为抗炎研究的理想模型。本实验通过观察FK506预处理对内毒素休克小鼠及重症急性胰腺炎大鼠的干预，对其抗炎作用及可能机理进行了初步探讨。 实验一：FK506对内毒素休克小鼠的保护作用 目的：探讨FK506对内毒素休克的干预作用及其可能机制。方法：①模型建立及动物分组：LPS腹腔注射(25 mg／kg)诱导内毒素休克小鼠模型。昆明鼠155只，随机分为LPS组(n=80)和LPS+FK组(n=75)。实验前2 d始，LPS+FK组小鼠以FK506(0.5 mg／kg)灌胃，每12 h给 第四军医大学硕士学位论文 石石奋‘石石石石三石奋面石石石石 予相同剂量维持;LPS组以生理盐水替代FKSO6作为对照。随机抽取LPS 组小鼠20只、LPS+FK组小鼠巧只进行生存率动态观察。两组内剩余小 鼠于LPS注射后0、0.5、2、4、6、sh分别各活杀10只，摘除眼球采 血，剖胸、腹取肺脏及肝脏组织。②监测指标:a.观察LPS注射后72h 内两组小鼠的病理反应、初始死亡时间和死亡数;绘制Kaplan一Meier生 存曲线，计算中位生存时间。b.左肺用吸水纸迅速吸取表面水分和血液， 电子天平称重;置于8了烘箱内烘干48小时至恒重，再次称重并计算肺 组织湿重/干重比值(W/D);右肺及右叶同一部位肝组织固定、包埋、切 片，日E染色，光镜下观察肝肺病理组织学改变。C.采集血液室温下放置 lh，待样本完全凝固后以2500 r/min速度离心巧min，吸取上清。TRACE CB’了’半自动生化分析仪上测定LPS注射后0、sh两组小鼠血清ALT、AST 含量;放免法测定oh、0.sh、Zh、4h、6h、sh血清TNF一a、IL一1 日含量。结果:①FK506干预小鼠生存质量明显提高;中位生存时间由 16h延长至54.sh，72h生存率由10%而增加到46.67%。②FK506干预 小鼠各时间点肺湿重/干重(W/D)比值均低于LPS组对照;肺组织病理 学损害亦较轻，肺实质、间质的炎性渗出较少，未见坏死灶，仅少量中 性粒细胞浸润。③FKSO6干预小鼠血清ALT、AST含量均低于L咫组对照; 肝脏组织病理学变化也较轻，肝细胞肿胀、变性及炎细胞浸润均较轻， 并未见肝细胞坏死。④FK506干预小鼠各时间点血清TNF一Q、IL一1日含 量均低于LPS组对照，两组小鼠血清TNF一Q、IL一lp含量变化均呈先升 后降趋势，TNF一a于Zh达峰值，IL一lp于4h达峰值。结论:FK506 预处理可延长内毒素休克小鼠生存时间，减轻LPS所致的肝肺损伤程度: 通过抑制炎症介质生成而下调炎症反应，可能是其作用机制之一。 实验二:FK506预处理对重症急性胰腺炎大鼠的保护作用 目的:探讨FK506对内毒素休克的干预作用及其可能机制。方法: ①模型建立及动物分组:采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射(40 mg/kg) 构建急性重症胰腺炎大鼠模型。健康雌性SD大鼠54只，随机平均分配至 刀日p口红心哪切7D卿次7r力”en亡4 第四军医大学硕士学位论文 1石奋宙‘面函石石‘石汤石‘石面 SA尸组(n=18)、SAP+FK组(n二18)和50组(n二18)。50组大鼠仅行剖腹 探查，牵引胰腺后关腹。实验前Zd始，SAP+FK组大鼠以FK506( 0.5 mg/kg) 灌胃，每12h给予相同剂量维持:SAP组及50组以生理盐水替代FK506 作为对照。上述各组内分为3h、6h和12h时相，各时相6只大鼠; 于各相应时相终末，处死大鼠，门脉采血，胸腹联合剖开取胰腺、肺组 织。②监测指标:a.于术后相应时间点，观察各组大鼠的存活率、腹水 量、胰腺及肺脏的大体病理变化。b.采集血液于室温下放置lh，待样 本完全凝固后以2500r/min速度离心巧min，吸取上清，测定各组大鼠 血清AMY、TNF一Q、儿一1日的含量。c.取左肺，吸水纸迅速吸取表面水 分和血液，电子天平称重;置于8。”烘箱内烘干48小时至恒重，再次称 重并计算肺组织湿重/干重(W/D)比值。d.取右肺及胰腺，固定、包埋、 切片，HE染色，光镜下观察胰腺及肺病理组织学改变。结果:①FK预处 理大鼠于术后12h全部存活，SAP组大鼠仅存活6只;②FK506预处理 大鼠各时间点腹水量、血清AMY含量均低于SAP组;血清AMY的含量随 着时间的推移呈增高趋势，12h点达到高峰。③FK506预处理大鼠各时 间点肺W/D比值均低于SAP组，肺组织病理学损害亦较轻。④FKS肠预除 理大鼠各时间点胰腺组织病理学损害均较SAP组轻。⑤FK506预除理大鼠 各时间点血清TNF一、工L一lp含量均低于SAP组，两组小鼠血清TNF- Q、IL一1日含量变化均呈先升后降趋势，TNF一。于3h达峰值，工L一1日 于6h达峰值。结论:FK506预处理可减轻重症急性胰腺炎的损伤程度; 抑制炎症介质生成释放可?