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SARS-CoV免疫噬菌体抗体库的构建及筛选

李郁  
【摘要】:严重呼吸窘迫综合症(SARS)常常是致命性的呼吸道疾病,该疾病由新的SARS冠状病毒引起。2002-2003年,该疾病在世界范围内流行,此后,可能是因为与携带病毒的动物接触,在我国南部持续出现散在的病例。2004年,在我国出现了两个实验室感染的病例并在公众中传播,引发了大范围的病源追踪,病源接触者的隔离以防止新的流行。这说明SARS疾病在未来还是有复发的可能,所以,还是有必要发展一些通过主动或被动免疫以控制SARS冠状病毒感染的方法。本研究利用噬菌体表面呈现技术,以SARS-CoV刺突蛋白(S)RBD为抗原,筛选获得其人源抗体,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。 本实验共分为四个部分内容: 第一部分:SARS-CoV刺突蛋白(spike,S)受体结合区(receptor binding region, PSD)的原核表达 我们采取原核表达的方式,表达了SARS—CoV S RBD的193个氨基酸,主要目的是选取这一段进行人源抗体的筛选将减少其它非中和位点的干扰,能更有效地筛选到中和抗体。首先用RT—PCR扩增SARS-CoV srbd基因,经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后插入原核表达载体PET30b(+),IPTG诱导表达后用以HiS-Tag亲和层析纯化表达产物,用SARS病人恢复期血清进行ELISA和Western blot鉴定。结果显示RT—PCR扩增得到一570bp左右的DNA片断;插入PET30b(+)后经酶切及测序证实为SARS-CoV s


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