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VEGFR_2siRNA腺病毒载体的构建及其对肿瘤血管生成的影响

黄大伟  
【摘要】:目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR_2)siRNA的腺病毒载体,在VEGFR_2表达阳性的肿瘤细胞系LOVO和SGC7901中,观察该重组腺病毒对VEGFR_2蛋白表达水平的影响,并检测该重组腺病毒体内的抗肿瘤活性,进而为肿瘤的血管抑制治疗奠定实验基础。 方法:(1) 构建含有VEGFR_2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR_2siRNA);(2) 利用HindⅢ与Xba Ⅰ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR_2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterless pShuttle vector,得到pShuttle-mU6pro-VEGFR_2siRNA;(3) 将pShuttlemU6pro-VEGFR_2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-mU6pro-VEGFR_2siRNA,并进一步在293细胞中包装、扩增得到高滴度的重组腺病毒;(4) 利用得到的重组腺病毒转染LOVO和SGC7901肿瘤细胞系,采用western blot检测感染前后VEGFR_2蛋白表达水平的变化;(5) 利用细胞生长曲线检测重组腺病毒对肿瘤细胞系LOVO、SGC7901生长的影响;(6) 建立SGC7901-裸鼠肿瘤模型,局部注射重组腺病毒后,观察其对肿瘤生长、肿瘤血管生成的抑制作用。 结果:(1)成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR_2)siRNA的腺病毒载体,该重组腺病毒显著抑制LOVO和SGC7901细胞中VEGFR_2的蛋白表达水平(p0.01);(2)细胞生长曲线显示重组腺病毒可明显抑制


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