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乳大鼠、乳小鼠大脑皮层神经元原代培养及汉坦病毒体外感染

崔继红  
【摘要】:汉坦病毒(HTV)属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS)的致病病毒。HTV是一种泛嗜性病毒,病毒抗原在体内多种器官和多种类型细胞中分布。脑组织也是HFRS病毒感染的重要靶器官之一。我们以往的研究证实HTV感染乳鼠脑神经细胞中NP抗原免疫组化染色阳性,定位于胞浆内,分布于皮层、海马回、小脑蒲肯野细胞层等部位。 本实验首先建立了乳小鼠、乳大鼠大脑皮层神经元体外培养的体系,以此作为病毒感染的靶细胞,在体外对HTV在脑皮层神经元中的感染以及病毒感染对神经元的影响进行初步研究。实验中采用出生后24hr之内的乳大鼠、乳小鼠,在无菌条件下取大脑皮层组织,做神经元的原代培养,在此基础上感染HTVL99株,分别于感染后1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d收集细胞,进行HE染色和免疫细胞化学染色,观察神经元的生长状况和病毒抗原的表达。结果显示,病毒感染后1d即可在大鼠神经元中检测到病毒抗原,而在小鼠神经元中最早检测到病毒抗原时间为感染后2d,病毒抗原呈细小颗粒状出现于感染细胞胞浆中,随着感染时间的推移,HTV NP表达的阳性强度和神经元阳性率逐渐增加(P0.01)。神经元从感染第二天开始就可以见到有少数细胞漂浮,突起减


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