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汉滩病毒核蛋白T细胞表位的鉴定

王美亮  
【摘要】:目的:鉴定出汉滩病毒核蛋白(HTNV-NP)上的CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表位。 方法:(1)用HTNV-NP部分重叠合成肽体外刺激HFRS患者PBMC,应用ELISPOT方法筛选出可刺激HFRS患者PBMC产生IFN-γ的合成肽组,再筛选出该组中的单个阳性15肽。(2)用EB病毒转化HFRS患者PBMC,建立EBV转化的B淋巴母细胞系(B-LCL)。用免疫磁珠分离HFRS患者PBMC中的CD4~+T细胞或CD8~+T细胞作为效应细胞,与加载过阳性15肽的自身B-LCL共同孵育,应用ELISPOT方法确定15肽可否刺激CD4~+T细胞或CD8~+T细胞产生IFN-γ,可刺激CD4~+T细胞产生IFN-γ的15肽即为CD4~+T细胞表位,可刺激CD8~+T细胞产生IFN-γ的15肽中,则可能包含有CD8~+T细胞表位。(3)应用生物信息学对可刺激CD8~+T细胞产生IFN-γ的15肽序列中包含的9肽表位进行预测,用蛋白质自动合成仪合成预测9肽,并应用ELISPOT鉴定出其中可刺激CD8~+T细胞产生IFN-γ的9肽CTL表位。(4)用HLA-DR、DP和DQ的阻断抗体与PBMC预先孵育30min后,再加入15肽,共同孵育过夜,应用ELISPOT阻断试验确定CD4~+T细胞表位的HLA-DR、DP或DQ限制性。(5)以


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