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猪血管内皮细胞对人血清适应状态的建立及发生机理的研究

李孟彬  
【摘要】:异种移植是解决供体器官短缺的有效办法,然而其异常强烈的排斥反应阻碍了其在临床上的应用。适应作为介于排斥和耐受之间的一种状态得到大家广泛的关注,并将其作为克服急性血管性排斥反应(acute vascular rejection,AVR)的一个途径。本研究即是基于上述的认识,通过培养猪主动脉血管内皮细胞(Porcine Arteriae Endothelial Cell,PAEC),以多种形式诱导其适应状态的发生,并采用基于PCR的改良消减杂交技术对PAEC适应前后差异表达基因进行筛选、测序,以获取适应状态PAEC可能发生的生物反应的信息,为研究适应的发生机制寻找线索。 本研究分为三部分,分别总结如下: 第一部分 猪血管内皮细胞的培养及鉴定 目的:通过PAEC的培养与鉴定,为异种移植体外实验研究模型的建立提供材料和方法。方法:自试验用乳猪采血制备猪的自体血清,在麻醉下切取猪的主动脉,以1%胶原酶Ⅰ消化法获取血管内皮细胞,进行内皮细胞的原代培养,并分别以胎牛血清、猪自体血清进行继续培养,绘制生长曲线,推算倍增时间以及贴壁率,采用DiI-Ac-LDL吸收试验鉴定细胞类型和纯化程度。结果:初步观察猪自体血清进行原代培养其贴壁率为92.3%高于胎牛血清培养组87.6%,倍增时间19.02hr快于胎牛


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