采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因的研究

【摘要】：在本实验中，运用mRNA DD-PCR技术，以细胞株GC7901与GES-1为研究对象，采用Liang与Pardee改进的第三代引物，摸索并建立了差示PCR的优化条件，建立的条件为：前5轮采用94℃35S，40℃ 2min，72℃ 30S，后35轮循环采用94℃35S，55℃ 2min，72℃ 1min，最后在72℃延伸7min。运用建立的条件，进行了差示PCR，扫描确定并分离回收了差异条带154条，胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的有82条；胃粘膜细胞株泳道中存在而胃癌细胞株泳道中缺失的有35条；胃癌细胞株泳道中表达高于胃粘膜细胞株泳道中的有23条；胃粘膜细胞株泳道中表达高于胃癌细胞株泳道中的有14条；分别来自于H-T_(11)G、H-T_(11)C、H-T_(11)A锚定引物的差异条带为61条、47条、46条。从筛出的片段中随机挑取了17个差异条带(命名为GCYS-1至17)作探针，与细胞株GC7901及GES-1总RNA进行打点杂交，结果证实17个片段在两个细胞株之间呈差异表达。采用PCR产物直接测序及全自动测序技术获取了17个差异片段序列，利用计算机网络对序列进行GenBank同源性检索分析，发现GCYS-4、5、6、13四个序列为新序列，其余13个序列与GenBank中序列有部分同源，其中GCYS-17序列与HEK-5 3’端序列有97％同源性，与ERK序列有97％同源性。针对获取的序列重新设计了16对引物，第17对引物采用ERK引物，计算机分析表明这17对引物具有特异性。利用RT-PCR方法对细胞株、新鲜组织标本、血标本进行了检测。结果表明：通过对GES-1及GC7901细胞

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前20条

1	崔大祥,阎小君,苏成芝;采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义(英文)[J];第四军医大学学报;1998年06期
2	张勇;杨彤涛;李存孝;胡运生;马保安;范清宇;;人成骨特异性转录因子cDNA胞外区片段的克隆和序列分析[J];现代肿瘤医学;2006年06期
3	周仲春;丁显平;朱一剑;;人乳头瘤病毒6和11亚型E6、E7基因的克隆及序列分析[J];现代预防医学;2008年02期
4	谢曙英;殷旭仁;华万全;曾小军;陈红根;梁幼生;高琪;余传信;;日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因克隆和序列分析[J];中国血吸虫病防治杂志;2008年06期
5	李学军;夏凌辉;宋善俊;孙碧红;李永敢;;人fgl2凝血酶原酶cDNA的克隆、序列分析及真核表达载体的构建[J];临床血液学杂志;2010年03期
6	王军军,任瑞文,田小东,方美玉,洪文艳;广州登革病毒1型NS2a-NS2b基因序列分析[J];热带医学杂志;2005年04期
7	邹朝霞;张春晶;吴丽芳;刘莹莹;房绍红;周宏博;;人谷氧还蛋白1基因克隆及真核表达载体的构建[J];哈尔滨医科大学学报;2006年05期
8	何炜;李克;朱涵;樊青霞;;黑色素瘤抗原-1基因的克隆与序列分析[J];郑州大学学报(医学版);2008年01期
9	马宏进，王建安，汲言山，沈倍奋，陈虹宇;人白细胞分化抗原CD28基因克隆及序列分析[J];中国免疫学杂志;1995年06期
10	丁静娟;HCVNS5B区序列克隆和重组质粒的构建[J];贵州医药;1997年04期
11	白云,姜曼,朱锡华;人白细胞分化抗原CD59基因克隆及序列分析[J];中国免疫学杂志;1999年03期
12	曾凡才;李洪;邵军;吴民泸;;人乙醇脱氢酶ADH1C*1等位基因的克隆与鉴定[J];泸州医学院学报;2006年01期
13	余俊龙;汪世平;何卓;戴橄;姜孝新;曾少华;肖晓芹;周松华;李文凯;徐绍锐;吕志跃;彭先楚;;日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达[J];中南大学学报(医学版);2006年04期
14	郑斌,郑焕钦,何蔼,李卓雅,曹爱莲,张瑞琳,詹希美;弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白基因的序列分析及其在大肠埃希菌中的表达[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年02期
15	丛宪玲;田亚萍;陈越;王丽颖;于永利;;人乳头瘤病毒6型E7基因完整开放阅读框架的克隆和鉴定[J];中国实验诊断学;2005年06期
16	梁韶晖;黄慧聪;潘长旺;邢文鸾;秦茜;诸葛青云;谭峰;;阴道毛滴虫重组蛋白AP33的制备、鉴定和初步应用[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2006年01期
17	刘昀;孙秀珍;张王刚;李唯;冯向莉;徐晶;;霜天蛾主要变应原的克隆、筛选及序列分析[J];南方医科大学学报;2007年08期
18	龚伟;王允玲;姜泊;张宏权;;Migfilin基因的克隆和真核表达载体的构建[J];广东医学;2007年10期
19	鞠辉明;王霞;周元国;刘宗平;陈星云;;大鼠RGS4基因的克隆及在原核中的表达[J];第三军医大学学报;2007年23期
20	俞莉敏;杨昀焯;吴镇权;李继云;;342bp人骨形态发生蛋白2成熟肽基因的克隆表达[J];现代中西医结合杂志;2008年21期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	李平;刘苹;熊仁平;赵艳;朱敏;周元国;;Wistar大鼠c-Ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年
2	生书晶;赵树进;;何首乌Ⅲ型PKS基因的克隆和表达分析[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
3	赵凤;班谦;赵宗胜;剡根强;;绵羊甘露聚糖结合凝集素基因的克隆及序列分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
4	鞠丽;曹瑞兵;吴鹏;陈溥言;;5株流行性乙型脑炎病毒华东分离株NS1基因多态性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年
5	杜爱芳;李孝军;侯玉慧;王素华;;捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
6	章振华;李永清;谌南辉;周雪媚;徐福洲;王宏俊;陈小玲;;鸡补体分子C3d的基因克隆及序列分析[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（下）[C];2005年
7	许宽勇;王三红;王庆菊;章镇;;富士苹果Ca~(2+)/H~+反向转运体基因克隆、序列分析及其亚细胞定位(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
8	黄天培;黄张敏;黄志鹏;潘洁茹;姚帆;俞晓敏;张灵玲;黄必旺;关雄;;苏云金芽孢杆菌cry2新基因的克隆及序列分析[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
9	陈樱;黄伟坚;罗廷荣;刘芳;温荣辉;陆芹章;廖素环;;广西猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5、ORF6和ORF7基因的克隆、序列分析及分子流行病学调查研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
10	魏琦超;高峰;;蓝猪耳肌动蛋白基因的克隆与序列分析[A];河南省细胞生物学学会第二届会员代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	崔大祥;采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因的研究[D];第四军医大学;1998年
2	王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
3	张幸果;甘蓝型油菜自交不亲和性的初步研究[D];华中农业大学;2008年
4	陈留存;小鼠新基因msid2结构与功能的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
5	邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
6	章世元;鸡钙代谢调节相关基因的克隆重组与表达研究[D];南京农业大学;2005年
7	曾幼玲;盐爪爪和盐穗木的耐盐生理生化及耐盐相关基因的克隆与表达研究[D];新疆大学;2007年
8	丰胜求;猪Angptl家庭基因的克隆、表达及调控研究[D];华中农业大学;2007年
9	杨欣艳;人胃癌中Survivin基因的克隆与功能研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
10	林展;小麦膨胀素基因的分离、克隆与功能鉴定[D];中国农业大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	张成伟;棉花GhADF基因克隆和表达分析[D];华中师范大学;2006年
2	曾节;带芒草属低分子量谷蛋白基因的克隆及序列分析[D];四川农业大学;2008年
3	王天阳;南方根结线虫flp-16、flp-27、flp-31基因的克隆及其表达原位杂交分析[D];中国农业科学院;2008年
4	韩畅;带芒草属低分子量谷蛋白基因研究[D];四川农业大学;2009年
5	张杰;草莓pgip基因的克隆及其序列分析[D];四川农业大学;2008年
6	刘相萍;发育调控基因Pax2的克隆化及重组Pax2的真核表达[D];青岛大学;2004年
7	宋利;金丝猴胰岛素样生长因子Ⅰ克隆、表达及其序列分析[D];四川大学;2005年
8	许慧霞;TTV抗原ORF1的基因克隆及原核表达[D];郑州大学;2005年
9	胡俊;新疆滨藜（Atriplex patens）核糖体失活蛋白的基因克隆和表达[D];新疆大学;2007年
10	汪小会;拟黑多刺蚁CREB基因的克隆与原核表达[D];陕西师范大学;2008年

中国重要报纸全文数据库

前10条

1	记者高原;吸烟会使人体基因表达异常[N];新华每日电讯;2010年
2	记者　李雪梅;酒精影响基因表达[N];人民日报;2006年
3	张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年
4	陈勇;基因表达有性别差异“对性下药”有望实现[N];医药经济报;2006年
5	张忠霞;美科学家利用RNA激活基因[N];医药经济报;2007年
6	记者耿挺;脑是怎样发育的[N];上海科技报;2007年
7	记者李含;诺奖得主引领学子探寻RNA微观世界[N];新清华;2007年
8	海文;美找到激活基因新方法[N];中国医药报;2007年
9	记者操秀英姜海;美发现数百个控制女性生育基因[N];科技日报;2007年
10	;胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达[N];中国医药报;2003年

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