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RT-PCR对水中肠道病毒灭活效果及机制的评价研究

张文清  
【摘要】:本实验在建立水中脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)消毒实验细胞感染模型的基础上,分别通过逆转录PCR(RT-PCR)、蚀斑计数试验(PFUA)和免疫印迹试验(DIBA)检测热力、紫外线、氯、碘4种理化消毒因子处理后PV 1 Henan株的核酸完整性、感染性和抗原性灭活指标,旨在重点探讨逆转录PCR(RT-PCR)应用于水中PV消毒效果评价时其方法的先进性和指标的代表性、安全性以及不同消毒因子的消毒机制。为扩大RT-PCR的检测范围,本实验通过广谱引物半套式PCR(GP-PCR)检测了水中4种10型共4株肠道病毒及甲肝病毒、轮状病毒,以期评估PCR应用的广泛性,为此,本实验按以下三个部分进行。 第一部分 水中脊髓灰质炎病毒消毒实验细胞感染模型的建立。 Ⅰ.病毒株与细胞系的筛选实验。比较5种PV 1毒株在5种细胞系中增殖3~7天后的细胞病变作用(CPE)、半数组织培养感染量(TCID_(50))、蚀斑计数(PFUA)及免疫印迹(DIBA)试验结果,提示同一细胞系中病毒感染细胞作用(CPE、TCID_(50))强弱为Henan、Hebei>Brunhide、Mahony>Sabin株;不同细胞系对同一病毒株的敏感性为Hep-2>BGM>Hela、Vero>RD细胞。PFUA及DIBA检测显示:Henan株较Brunhide更易检出。因此选用Henan株及Hep-2


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