收藏本站
收藏 | 论文排版

人源抗HBsAg抗体Fab段及dsFv基因的克隆和表达

宋宏彬  
【摘要】:抗体技术经历了第一代抗体——血清多克隆抗体,第二代抗体——单克隆抗体,又发展到第三代抗体——基因工程抗体。基因工程抗体技术具有多方面的发展潜力,这一技术能够避开免疫而直接获得抗体,特别是人源抗体,这为人源抗体的生产及应用开辟了广阔的前景。 我们首先应用噬菌体抗体库技术筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体,获得了一株亲和力较高的人源抗HBsAg噬菌体,酶切分析发现其具有完整的重链基因,但轻链缺失。利用全自动测序仪测定了其重链基因序列,经分析说明获得的人源抗HBsAg噬菌体重链基因可变区(V_H)属于人V_HⅠ亚群。并用ELISA及竞争抑制试验测定了其活性及特异性,证实此抗体片段仍具有较好的抗原结合活性和特异性。为了提高抗体的亲和力,我们进行了链替换试验:将PCR扩增的人抗体轻链基因,插至已克隆有人源抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体重链Fd基因的噬菌粒中,构建成轻链替换文库,经亲和淘洗,从该文库中筛选出了与重链Fd基因相匹配的轻链基因。链替换后,噬菌体抗体(phab)的ELISA光吸收值(A)从0.72±0.02提高到最高为1.24±0.10,说明其亲和力得到了提高。抑制实验证实,所筛选出来的phab具有抗HBsAg的特异性。序列分析了ELISA光吸收值(A)最高的5株phab的轻链基因,结果表明,3株K链的碱基序列基本一致,属V_kⅢ亚群;2株λ链的基因序列相同,均属VλⅠ亚群。高效表达是基因工程抗体走向临床的关键问题之一,我们进一步将抗HBsAg抗体的轻链(L)和重链Fd段基因,分别克隆于pET20b质粒中并分别转化到大肠肝菌BL21(DE3),IPTG诱


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈竞华,王琰,刘群英,王雅明,徐建军,刘华;人源性噬菌体抗体库的构建及HBsAg人单抗的筛选[J];中华微生物学和免疫学杂志;1995年03期
2 郑伟,檀华,宋少柏,逯好英,王琰,余燕星,尹茹;抗HBsAg Fab片段和α-干扰素融合蛋白的克隆及表达[J];中华肝脏病杂志;1998年04期
3 余宙耀,粟宽源,任向荣,曾平鲁,张宜俊,高辉,高磊;工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定[J];上海免疫学杂志;1999年02期
4 刘晓琳,王琰,张达矜,陈宇萍;抗HBsAg/RBC双特异噬菌体抗体的构建[J];中华微生物学和免疫学杂志;2003年11期
5 宋宏彬;贾雷立;唐晓敏;刘雪林;周育森;高志贤;;抗HBsAg dsFv和α-干扰素融合基因表达载体构建[J];中国公共卫生;2007年09期
6 范列英,韩焕兴,胡东平,孔宪涛;人抗乙型肝炎表面抗原Fab片段的表达及活性鉴定[J];解放军医学杂志;1996年05期
7 李宝玺,陈崇智;小剂量FNα治疗HBV标志的疗效[J];世界华人消化杂志;1996年01期
8 宋宏彬,毛春生,陈薇,徐德忠,王海涛;抗HBsAg二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)突变基因的构建与序列分析[J];细胞与分子免疫学杂志;1998年04期
9 施沛琴;白细胞α-干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效观察[J];江苏医药;1998年02期
10 成军!100039北京,钟彦伟!100039北京,施双双!100039北京,倪勤!100039北京,夏小兵!100039北京,董菁!100039北京,王刚!100039北京,刘友昭!100039北京,王琳!100039北京,刘妍!100039北京,杨继珍!100039北京,陈菊梅!100039北京;乙型肝炎病毒表面抗原人源单链可变区抗体基因的克隆与鉴定[J];肝脏;2000年03期
11 王志毅,刘杞,万泽生,张定凤;从人源性噬菌体抗体库中筛选人抗HBsAg的Fab噬菌体抗体(摘要)[J];中西医结合肝病杂志;2000年S1期
12 石小枫,刘杞,王志毅;人抗HBs轻链基因的序列测定及序列分析[J];重庆医科大学学报;2004年05期
13 张广发,陈竞华,王雅明,徐建军,刘华,王琰,刘群英;用噬菌体抗体库技术筛选单克隆抗体[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1995年02期
14 黄方,郑孟传,张滨,陶建婷;干扰素治疗儿童慢性乙型肝炎的研究[J];广州医药;2004年01期
15 徐慧文,徐经武,王学良,门伯媛,杨少毅;乙型肝炎病毒(HBV)感染者粪便中HBsAg检出情况及其传染性研究[J];西安交通大学学报(医学版);1988年04期
16 林培勋,曾明正,柴小玲;血清HBsAg阳性患者尿中HBsAg阳性率的观察[J];同位素;1989年03期
17 赵喜桂,姚昌友;湖北大学八九级学生HBV血清流行病学调查[J];湖北大学学报(自然科学版);1990年04期
18 赵小侠,曹雷,毛冬丽,张爱臣,王平,侯云德;痘苗病毒载体介导的反义RNA抑制HBsAg基因表达的研究[J];病毒学报;1991年04期
19 刘旭明,孙兰芬,唐新萍;用维多利亚蓝显示HBsAg实际意义的探讨[J];西北国防医学杂志;1992年03期
20 李志中;刘菊兰;曾庆凯;;娄底地区压力蒸汽灭菌效果调查[J];中国消毒学杂志;1992年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 苏成豪;马桂林;沈理通;牛建军;;355例HBsAg携带者转归及其影响因素调查[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年
2 徐国胜;游冉冉;黄可君;曾四海;廖剑锋;;广州地区HBsAg阳性无偿献血者的调查分析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
3 张少俊;;肺结核患者化疗中肝损害与HBsAg的关系[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
4 张素能;史志红;王欣欣;;金标法筛查HBsAg在无偿献血工作中的应用分析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
5 张少俊;;肺结核患者化疗中肝损害与HBsAg的关系[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
6 陈瑜;李兰娟;楼滨;范剑;藤敏;李永红;;血清乙肝表面抗原检测弱反应结果的确认方法及其评价[A];2004年浙江省检验医学学术会议论文汇编[C];2004年
7 陆登辉;;口腔科器械HBsAg污染状况及不同消毒方法效果评价[A];中国医院协会第十三届全国医院感染管理学术年会论文汇编[C];2006年
8 陆登辉;;口腔科器械HBsAg污染状况及不同消毒方法效果评价[A];中华医院管理学会第十二届全国医院感染管理学术年会论文汇编[C];2005年
9 董菁;成军;王勤环;施双双;朗振为;洪源;李莉;斯崇文;;乙型肝炎病毒表面蛋白(HBsAg)核酸疫苗免疫HBsAg转基因小鼠的实验研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
10 吴娟;曾卫;;98例HBsAg阳性患者血清前S1抗原测定结果分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋宏彬;人源抗HBsAg抗体Fab段及dsFv基因的克隆和表达[D];第四军医大学;1999年
2 李承新;人源性抗角蛋白单链抗体的构建、表达和Fab片段生物学作用及其分子机理的研究[D];第四军医大学;2001年
3 梁敏锋;隐匿性HBV感染和经抗病毒治疗HBsAg清除者的细胞免疫应答特点的研究[D];南方医科大学;2010年
4 朱军民;摩氏摩根菌噬菌体MmP1生物学特性及其基因组学的研究[D];第三军医大学;2008年
5 关正君;樱桃番茄的HBsAg基因转化及其突变体特性研究[D];西北大学;2011年
6 罗弋;抗Peroxiredoxin I肺腺癌噬菌体抗体的制备、抑制肺腺癌细胞增殖研究及其在荷人肺腺癌裸鼠模型中的放免显像[D];重庆医科大学;2010年
7 李振莉;非免疫性人抗体Fab片段噬菌体文库的构建[D];天津医科大学;2004年
8 侯淑萍;衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1单克隆抗体的制备及初步应用[D];天津医科大学;2010年
9 姚卫锋;衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白VP1的表达及蛋白间作用的研究[D];天津医科大学;2010年
10 李朵璐;人IFN-γ在表达HBsAg肝细胞中的特异性表达及其体外抑制乙肝病毒的作用[D];郑州大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邢延清;不同稀释法检测HBsAg定量的比较及临床意义[D];山东大学;2011年
2 于鸽;溶藻弧菌噬菌体、菌影疫苗及其对对虾免疫保护性的比较研究[D];广东海洋大学;2011年
3 刘涵云;HBsAg定量检测在慢乙肝自然史中的研究[D];青岛大学;2011年
4 王红臻;肝硬化患者HBsAg定量检测的意义[D];青岛大学;2011年
5 高燕;人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素免疫功能验证[D];曲阜师范大学;2012年
6 江乐;人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素复合基因的克隆和表达[D];曲阜师范大学;2010年
7 李蒙;柑橘溃疡病菌单链二硫键稳定重组抗体的设计构建与表达[D];重庆大学;2010年
8 王艳红;HBsAg的单克隆抗体制备、表位分型及其应用研究[D];东北林业大学;2010年
9 黄小红;血清HBsAg水平对核苷(酸)类似物抗病毒治疗达标停药复发的预测价值[D];广西医科大学;2011年
10 王寒;慢性HBV感染者血清HBsAg和HBeAg定量分析的临床意义[D];昆明医学院;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 祖雄林;HbsAg携带者不一定会转为肝硬化[N];大众卫生报;2004年
2 陈素英;HBsAg假阳性和假阴性原因分析[N];中国国门时报;2004年
3 应医师;乙肝病毒携带者有何法可使转阴[N];上海中医药报;2000年
4 本报记者 晏子;他们为什么不能上大学?[N];大众科技报;2000年
5 副主任医师 陈耀凯;如何看“乙肝两对半”结果[N];重庆日报;2001年
6 北京大学基础医学院微生物学教研室教授 庄辉;单项抗-HBc阳性说明……[N];健康报;2001年
7 李金明;解开“乙肝两对半”阴阳性之结[N];健康报;2003年
8 保生;教你看体检报告[N];消费日报;2002年
9 弋戈;肝炎的防治与保健[N];医药经济报;2002年
10 张哲;家有“三阳”病人[N];保健时报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978